|
Номер раствора |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
|
Объем раствора |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
0,005 |
0,012 |
0,025 |
|
Объем раствора |
0,05 |
0,10 |
0,15 |
0,25 |
0,50 |
1,00 |
2,5 |
5,0 |
- |
- |
- |
|
Количество |
0,025 |
0,050 |
0,075 |
0,125 |
0,250 |
0,500 |
1,25 |
2,5 |
5,0 |
12,0 |
25,0 |
|
Массовая |
0,001 |
0,002 |
0,003 |
0,005 |
0,010 |
0,020 |
0,05 |
0,1 |
0,2 |
0,48 |
1,0 |
8.4.4. Переносят 15,0 куб. см каждого градуировочного раствора в коническую пробирку вместимостью
15 куб. см и центрифугируют со скоростью 2000 об./мин. в течение 5 мин. Для получения одного измерения
отбирают 3 куб. см верхнего слоя мочи и проводят твердофазную экстракцию. Для
этого пропускают под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis
HLB 3cc 1 куб. см ацетонитрила, 1 куб. см
дистиллированной воды, 3 куб. см отцентрифугированной
мочи, 3 куб. см дистиллированной воды, 2 куб. см 20%-го
раствора ацетонитрила. Скорость потока не должна
превышать 1 куб. см/мин. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный
сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 куб. см ацетонитрила.
Полученный экстракт фильтруют через капроновый фильтр, используя медицинский
шприц "Луер", в стеклянную виалу и аликвотную часть (10 куб. мм) анализируют на
приборе.
8.4.5. Условия хроматографирования:
Колонка 2,1 х 150 мм, заполненная сорбентом Eclipse XDB-C ;
18
подвижная фаза - смесь ацетонитрила и воды в соотношении 25:75;
градиент: 10 мин. подача подвижной фазы
(25% ацетонитрила и 75% воды), увеличение ацетонитрила с 25 до 90% в течение 5 мин., 5 мин. подача
90% ацетонитрила, снижение ацетонитрила
до 25% в течение 5 мин., подача 25% ацетонитрила до
уравновешивания колонки (10 мин.);
скорость движения элюента 1,0 куб. см/мин.;
температура термостата колонки 27 °С;
флуориметрический детектор:
длина волны возбуждения 246 нм;
длина волны эмиссии 330 нм;
время удерживания диметилтерефталата: (8,6 +/- 0,1) мин.
8.4.6. Градуировочный
коэффициент рассчитывают по формуле:
n
SUM C / S
i=1 i i
K = -----------,
n
где:
C - концентрация диметилтерефталата в градуировочном растворе,
i
мкг/куб. см;
S - среднее значение трех измерений площади пика диметилтерефталата
i
i-й концентрации, расхождение между минимальным и максимальным значением из
которых не должно превышать 4% относительно среднего значения S единицы
i
оптической плотности (е.о.п.);
n - количество градуировочных смесей (n = 6).
8.4.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной
характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений.
Образцами для контроля стабильности являются градуировочные
растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация диметилтерефталата соответствовала нижней, верхней границам
и середине диапазона построения градуировочной
характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:
|X - C| <= 0,10 х C,
где:
C - заданная массовая концентрация диметилтерефталата в градуировочном
растворе;
X - результат измерения массовой
концентрации диметилтерефталата в градуировочном
растворе.
При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с
другим градуировочным раствором. При повторном
невыполнении условия стабильности градуировочной
характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной
характеристики.
8.5. Отбор проб
Отбирают мочу объемом не менее 20 куб. см
в стеклянную посуду с крышкой. Срок хранения проб в холодильнике 6 ч.
9. Выполнение
измерений
Выполняют два параллельных измерения
образца мочи. В коническую пробирку вместимостью 15 куб. см переносят 5,0 куб.
см мочи и центрифугируют со скоростью 2000 об./мин. в течение 5 мин., отбирают 3 куб. см верхнего слоя и
проводят твердофазную экстракцию, последовательно пропуская под вакуумом через
картридж с сорбентом Oasis HLB 3cc 1 куб. см ацетонитрила, 1 куб. см дистиллированной воды, 3 куб. см
мочи, 3 куб. см дистиллированной воды, 2 куб. см 20%-го
водного раствора ацетонитрила. Скорость потока не
должна превышать 1 куб. см/мин. Затем переносят патрон с сорбентом в
накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 куб. см ацетонитрила. Полученный экстракт фильтруют через
капроновый фильтр, используя медицинский шприц типа "Луер",
в стеклянную виалу и аликвотную часть (10 куб. мм)
анализируют в условиях, указанных в п. 8.4.5 настоящих МУ.
Идентификацию диметилтерефталата
проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических
пиков в анализируемой пробе и стандартном растворе.
10. Обработка
(вычисление) результатов измерений
10.1. Массовую концентрацию диметилтерефталата в моче (мкг/куб. см) вычисляют по
формуле:
X = S х K,
i
где:
X - массовая концентрация диметилтерефталата в анализируемой пробе,
мкг/куб. см;
S - площадь пика диметилтерефталата на хроматограмме, е.о.п.;
i
K - градуировочный коэффициент.
_
10.2. За результат измерения X принимают среднее арифметическое
значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости
X , X (параллельных определений), для которых выполняется условие:
1 2
X + X
1 2
|X - X | <= 0,01 х r х -------, (1)
1 2 2
где r - предел повторяемости. Значения предела повторяемости приведены
в табл. 3.
При невыполнении условия (1) получают дополнительно еще два результата
измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех
результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых
выполняется условие:
X + X + X + X
1 2 3 4
|X - X | <= 0,01 х CR (4) х -----------------, (2)
max,4 min,4 0,95 4
где CR (4) - критический диапазон. Значения критического диапазона
0,95
приведены в табл. 3.
При невыполнении условия (2) в качестве
окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов
измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений).
Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условия
(1).
10.3. Расхождение между результатами
измерений, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости:
_ _
X + X
1 2
|X - X | <= 0,01 х R х -------, (3)
1 2 2
_ _
где X и X - результаты измерений массовой концентрации
1 2
диметилтерефталата, полученные в разных лабораториях - средние
арифметические двух результатов измерений, полученных в условиях
повторяемости, для которых выполняется условие (1).
При выполнении условия (3) приемлемы оба
результата измерений, и в качестве окончательного может быть использовано их
среднее арифметическое значение. Значения предела воспроизводимости
приведены в табл. 3.
Таблица 3
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ,
ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
И КРИТИЧЕСКОГО ДИАПАЗОНА ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ
ВЕРОЯТНОСТИ P = 0,95
┌───────────┬──────────────────┬───────────────────┬────────────────┐
│ Диапазон │Предел повторя- │Критический диапа- │Предел воспроиз-│
│измерений, │емости (относи- │зон (относительное │водимости │
│мкг/куб. см│тельное значение │значение допуска- │(относительное │
│ │допускаемого │емого расхождения │значение допус- │
│ │расхождения между │между наибольшим и │каемого расхож- │
│ │двумя результатами│наименьшим четырех │дения между дву-│
│ │измерений, полу- │результатов измере-│мя результатами │
│ │ченными в одной │ний, полученных в │измерений, полу-│
│ │лаборатории в │одной лаборатории в│ченными в разных│
│ │условиях повторя- │условиях повторя- │лабораториях), │
│ │емости), r, % │емости), CR (4),│R, % │
│ │ │ 0,95 │ │
│ │ │% │ │
├───────────┼──────────────────┼───────────────────┼────────────────┤
│от 0,001 до│20 │25 │34 │
│1 включ. │ │ │ │
└───────────┴──────────────────┴───────────────────┴────────────────┘
11. Оформление
результатов измерений
_
Результат измерения представляют в виде (X +/- ДЕЛЬТА) мкг/куб. см, где
ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при P = 0,95, значение
ДЕЛЬТА рассчитывают по формуле:
_
дельта х X
ДЕЛЬТА = ----------,
100
где значение дельта приведено в табл. 1.
12. Процедуры
обеспечения достоверности измерений
Контроль стабильности результатов
измерений в пределах лаборатории организуют и проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и РМГ 76-2004 ГСИ.
Периодичность получения результатов
контрольных процедур и формы их регистрации приводят в документах лаборатории,
устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов
контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.
12.1. Алгоритм
оперативного контроля процедуры измерений
с использованием метода добавок
Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения
результата отдельно взятой контрольной процедуры K с нормативом контроля
к
K.
Результат контрольной процедуры K рассчитывают по формуле:
к
_ _
K = |X' - X - C |,
к д
где:
_
X' - результат измерений массовой концентрации диметилтерефталата в
пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов
измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми
удовлетворяет условию (1);
_
X - результат измерений массовой концентрации диметилтерефталата в
исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений,
полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми
удовлетворяет условию (1);
C - величина добавки к пробе, мкг/куб. см. Величина добавки должна
д
составлять не менее 40% от содержания диметилтерефталата в рабочей пробе.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
________________________
/ 2 2
K = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА ,
л,X' л,X
ср ср
где ДЕЛЬТА , ДЕЛЬТА - значения характеристики погрешности
л,X' л,X
ср ср
результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики,
соответствующие массовой концентрации диметилтерефталата в пробе с
известной добавкой и в исходной пробе соответственно.
Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений
при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражения:
ДЕЛЬТА = 0,84 х ДЕЛЬТА, с последующим уточнением по мере накопления
л
информации в процессе контроля стабильности результатов измерений.
Процедуру измерений признают удовлетворительной, при выполнении
условия:
K <= K. (4)
к
При невыполнении условия (4) контрольную
процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (4) выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их
устранению.
12.2. Алгоритм
проведения контрольной процедуры при контроле
внутрилабораторной прецизионности
Контрольные процедуры при контроле
промежуточной прецизионности получают с
использованием рабочих проб мочи.
При реализации контрольной процедуры получают два результата
_ _
контрольных измерений (первичного X и повторного X ) массовой концентрации
1 2
диметилтерефталата в условиях внутрилабораторной прецизионности.
Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при
выполнении следующего условия:
_ _
X + X
_ _ 1 2
|X - X | <= 0,01 х R х -------. (5)
1 2 л 2
Значение предела внутрилабораторной прецизионности (R , %) не превышает
л
31%.
13. Разработчики
"Федеральный научный центр
медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Роспотребнадзора.