"Методы контроля бактериологических питательных сред. Методические указания. МУК 4.2.2316-08" // Портал о здоровье, заболеваниях и лечении, о лекарствах, о докторах и больницах.

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной

службы по надзору в сфере

защиты прав потребителей

и благополучия человека,

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

18 января 2008 г.

Дата введения:

с момента утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.2.2316-08

1. Разработаны Федеральным государственным учреждением науки "Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени Л.А.Тарасевича" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (С.М.Суханова, Н.Е.Захарова, Э.И.Конду, И.А.Голубенко).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 декабря 2007 г. N 3).

3. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 18 января 2008 г.

4. Введены впервые взамен документов "Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред", (Москва, 1977) и "Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям" (Москва, 1980).

1. Область применения

1.1. Настоящие Методические указания предназначены для работников организаций, осуществляющих:

- изготовление и контроль качества бактериологических питательных сред (диагностических, для культивирования, транспортных и др.) и (или) их основ при серийном промышленном выпуске;

- конструирование новых питательных сред;

- изготовление сред из отдельных компонентов по прописям, а также могут быть использованы:

- при экспертизе НД и

- при проведении внутрилабораторного контроля качества коммерческих питательных сред.

1.2. Настоящие Методические указания распространяются на исследования бактериологических питательных сред отечественного и зарубежного производства.

2. Нормативные и методические ссылки

2.1. Государственная Фармакопея СССР XI издания. Вып. 1, 2.

2.2. Методические указания по методам контроля МУК 4.1/4.2.588-96 "Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям"/Минздрав России. М., 1998.

2.3. Санитарные правила СП 3.3.2.561-96 "Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов"/Минздрав России. М., 1998.

2.4. Санитарные правила СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности"/Госкомсанэпиднадзор России. М., 1996.

2.5. Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований: ГОСТ Р 51446-99 (ISO 7218-96).

2.6. Агар микробиологический: ГОСТ 17206-96.

2.7. Методические рекомендации "Определение сроков годности сухих микробиологических сред и питательных основ методом "Ускоренного старения" при повышенной температуре". Махачкала, 1987.

2.8. Водоросли морские, травы морские и продукты их переработки: ГОСТ 26185-84.

2.9. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям. М., 1980.

2.10. Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред. М., 1977.

2.11. Методические указания "Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам": МУК 4.2.1890-04.

3. Общие положения

3.1. Целью введения настоящих Методических указаний является регламентация стандартных методов контроля бактериологических питательных сред.

3.2. Методические указания содержат описание общих методов контроля бактериологических питательных сред. Особенности контроля качества сред, не охватываемые настоящим документом, должны быть описаны в нормативной документации на эти препараты.

4. Термины и определения

4.1. Бактериологические питательные среды (БПС) - препараты, предназначенные для выявления, накопления, культивирования, дифференциальной диагностики, транспортирования и хранения микроорганизмов.

4.2. МИБП (медицинские иммунобиологические препараты) - лекарственные средства, предназначенные для иммунопрофилактики, диагностики и иммунотерапии заболеваний.

4.3. Качество бактериологических питательных сред (основ, добавок) - совокупность свойств продукции, обусловливающих ее способность удовлетворять определенным требованиям в соответствии с назначением.

4.4. Серия препарата - количество препарата, полученного в результате смешивания сухих компонентов питательной среды в мельнице-смесителе или сушки жидкого полуфабриката (для сухих питательных сред) при одноразовой закладке. Для жидких или агаризованных питательных сред, готовых к применению, под серией препарата подразумевают совокупность емкостей, полученных из полуфабриката одной емкости.

4.5. Оценка результатов. Определение положительного или отрицательного результата.

4.6. Разведение культуры. Величина, указывающая во сколько раз была

-6 -7

разведена суспензия культуры (например, 10 , 10 и т.д.) в отношении

исходной, соответствующей 10 ед. по стандартному образцу мутности ФГУН

ГИСК им. Л.А.Тарасевича (ОСО-42-28-85 П).

5. Общие указания при оценке качества питательных сред

I. Оценка качества питательных сред и их компонентов проводится с помощью совокупности показателей, выбираемых для контроля среды в соответствии с ее назначением и включает <*>:

--------------------------------

<*> Используемые в лабораториях коммерческие питательные среды контролируются на предприятиях-изготовителях, поэтому внутрилабораторный контроль их качества проводят только в случаях:

- указания на необходимость проведения контроля в приказах Минздрава РФ, инструкции по применению или других документах;

- несоответствия клинического диагноза результатам микробиологического исследования в лаборатории;

- неудовлетворительного выполнения внешней оценки качества микробиологических исследований;

- неудовлетворительного качества среды при использовании в практической работе;

- несоответствия величины колоний искомого микроорганизма данному виду бактерий при росте в данной среде;

- позднего появления роста культуры в среде, не соответствующего срокам для данного микроорганизма;

- отсутствия подавления роста сопутствующей микрофлоры на среде с заявленными ингибирующими свойствами.

Для внутрилабораторного контроля качества коммерческих питательных сред, контроль которых не предусмотрен действующими нормативными документами, необходимо проводить визуальную оценку качества, определять значение pH готовой среды, стерильность каждой приготовленной серии (см. р. 7.1.1. "Контроль чистоты розлива"), а также оценивать качество среды с помощью контрольных штаммов.

1. Контроль качества препарата по физико-химическим показателям.

2. Контроль специфической активности препарата по биологическим показателям.

Перечень показателей, необходимых для контроля основных групп питательных сред, приведен в Прилож. 1.

Готовую среду засевают культурой (тест-штаммом) того (целевого) микроорганизма, для которого приготовлена среда, и гетерологичных штаммов и визуально (или под малым увеличением микроскопа) изучают характер его роста. Рост микроорганизмов оценивают с помощью количественных (для плотных сред), полуколичественных или качественных методов <*>.

--------------------------------

<*> Возможно использование среды сравнения - среды ранее отконтролированной и удовлетворяющей требованиям качества.

Для оценки результатов качественным методом определяют наличие и характер роста каждого из тест-штаммов. Рост целевых тест-штаммов должен быть типичным по цвету, размеру и морфологии колоний; рост нецелевых должен частично или полностью подавляться.

Для оценки результатов количественным методом при интерпретации ингибирующих, накопительных или задерживающих рост свойств среды подсчитывают количество выросших колоний на тестируемой и контрольной (среде выращивания) средах.

Требования к специфической активности зарегистрированных в РФ бактериологических питательных сред и добавок перечислены в Прилож. 2.

II. Количество образцов одной серии среды для контроля - не менее трех.

III. Серия среды признается годной только после проведения всех видов контроля.

6. Определение физико-химических показателей

6.1. Общие указания для приготовления реактивов

Концентрация. При указании концентрации растворов в процентах следует подразумевать весобъемные проценты. Например, для приготовления 10%-го раствора следует брать 10 г вещества на 100 мл готового раствора.

Точная навеска. Взвешивание на аналитических весах с точностью до 0,0002 г. Если не указано "точная навеска", то навеску берут с точностью до 0,01 г.

Постоянная масса - разница в массе между последовательными взвешиваниями, не превышающая 0,0005 г.

Оценка результатов. Результаты рассчитывают на основании не менее двух параллельных определений. За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое значений результатов двух параллельных измерений. Допустимое отклонение от средней величины не должно превышать 10%.

Реактивы и титрованные растворы. Реактивы и титрованные растворы, приведенные в настоящих МУК, описаны в соответствующих разделах Государственной Фармакопеи СССР XI издания, вып. 2, если нет других указаний.

Квалификация реактивов. Для анализа необходимо использовать реактивы квалификации хч и чда.

Растворитель - вода очищенная (ФС 42-2619-97), если нет других указаний.

Хранение реактивов. Растворы реактивов хранят при температуре 18-20 град. C в течение 6 мес., если нет изменений их физических свойств или нет других указаний.

Контрольный опыт (контроль на реактивы). Под контрольным опытом подразумевают определение, проводимое с тем же количеством реактивов и в тех же условиях, но без испытуемого препарата, вместо которого используют растворитель.

6.2. Описание препарата

Внешний вид препарата определяют визуально, указывая:

- физическое состояние (жидкость, мелкодисперсный порошок, гель);

- цветность <*>;

- прозрачность (для препаратов, готовых к применению). Препарат может быть либо прозрачным, либо с незначительной опалесценцией, либо мутный;

- гигроскопичность (для сухих препаратов);

- светочувствительность (при наличии в составе компонентов, разрушающихся на свету).

--------------------------------

<*> При описании цвета оттенок указывают перед основным цветом (например, "желтовато-коричневый").

6.3. Определение растворимости

Количество препарата (г), необходимое для приготовления конкретной серии питательной среды, должно растворяться при перемешивании и, если необходимо, при кипячении в течение 2-3 мин.

Препарат считают растворившимся, если в растворе при визуальном наблюдении в проходящем свете не обнаруживаются частицы вещества.

Для препаратов, образующих при растворении мутные растворы, соответствующее указание должно быть приведено в нормативной документации и инструкции по применению.

6.4. Определение прозрачности и цветности

Прозрачность и цветность сухих препаратов определяется визуально в проходящем свете в растворе после фильтрации его через ватно-марлевый фильтр (агаровые среды) и бумажный фильтр (жидкости) (подготовку образца см. раздел 6.3. "Определение растворимости") (см. примечание раздела "Описание препарата").

Прозрачность и цветность готовых сред, разлитых во флаконы, определяют визуально в проходящем свете. Агары предварительно расплавляют в кипящей водяной бане и разливают в чашки Петри слоем 4-5 мм.

Раствор препарата, а также готовая среда могут быть либо прозрачными, либо с незначительной опалесценцией, либо непрозрачными.

После приготовления среды из сухого препарата (стерилизации, розлива в чашки Петри, пробирки и подсушивания) показатель прозрачности и цветности указывается также и для готовой среды.

6.5. Определение pH

Определение pH питательных сред проводят потенциометрическим методом с применением стеклянного электрода.

Калибровка и проверка pH-метра (потенциометра). Подготовка pH-метра и электродной системы производится согласно инструкциям, прилагаемым к прибору. Перед работой на потенциометре необходимо, пользуясь стандартными буферными растворами со значениями pH 4,01; 6,86; 9,18 при 25 град. C, провести калибровку прибора <*>. Для приготовления таких растворов могут быть использованы фиксаналы (ГОСТ 8.135-74). Различие между показанием прибора и номинальным значением pH буферного раствора не должно превышать 0,04 единицы pH.

--------------------------------

<*> Если pH контролируемого раствора отличается менее чем на единицу от pH стандартного буферного раствора, то достаточна проверка прибора по одному буферному раствору, величина pH которого лежит в том же диапазоне измерения, что и значения pH контролируемого раствора. Если pH контролируемых растворов находятся в широких пределах, то проверку pH-метра следует производить по двум (трем) стандартным буферным растворам в соответствии с инструкцией.

При измерении pH контролируемых растворов отсчет величины pH по шкале прибора производят после того как показания прибора примут установившееся значение. Время установления показаний определяется буферными свойствами и температурой раствора (обычно время установления показаний не превышает 2 мин.). Определение pH проводят при (25 +/- 2) град. C, в противном случае необходимо сделать соответствующие поправки (подвести ручку термокомпенсатора либо использовать коэффициент пересчета). При измерении pH агаровых сред следует иметь ввиду, что полученные значения pH являются условными.

Оценку значения pH питательных сред необходимо проводить с учетом последующей стерилизации.

Примечание: автоклавирование, как правило, приводит к снижению pH, поэтому перед стерилизацией pH среды повышают на 0,2 единицы от требуемой величины, а после автоклавирования реакцию среды проверяют повторно.

Метод измерения pH

Подготовка проб:

- в готовых жидких средах и гидролизатах определение pH проводят непосредственно в растворе;

- для готовых плотных агаровых сред определение pH проводят в расплавленном и охлажденном до 45-50 град. C препарате (необходимо особо тщательно отмывать электрод после измерения pH в агаризованных средах теплой (50-60 град. C) дистиллированной водой; предпочтительно для этих сред пользоваться специально выделенным pH-метром). Возможно также определение pH в экстракте, приготовленном добавлением к 2,00 г измельченного студня 100 мл дистиллированной воды (pH 7,0-7,2), настаивания в течение 1 ч при температуре 18-25 град. C с периодическим перемешиванием стеклянной палочкой и последующим фильтрованием через бумажный фильтр;

- для сухих препаратов, не содержащих агар, определение pH проводят в 2%-м растворе, приготовленном добавлением к 2,00 г сухого препарата 100 мл дистиллированной воды, перемешиванием и последующим фильтрованием через бумажный фильтр;

- для сухих препаратов, содержащих агар, определение pH проводят в экстракте, приготовленном добавлением к 2,00 г сухого препарата 100 мл дистиллированной воды, настаиванием с периодическим перемешиванием в течение 1 ч при температуре 18-25 град. C и последующим фильтрованием через бумажный фильтр.

6.6. Определение белка

Качественное определение отсутствия следов белка в пептонах - компонентах питательных сред - проводят визуально с использованием трихлоруксусной кислоты (CCl3COOH) для их осаждения.

Реактивы: 20%-я трихлоруксусная кислота.

Ход определения

К 5 мл 5%-го раствора анализируемого препарата добавляют равный объем 20%-й CCl3COOH, тщательно перемешивают.

Помутнение раствора через 5 мин. свидетельствует о присутствии в препарате следов белка.

6.7. Определение содержания пептидов по

биуретовой реакции

Метод основан на способности пептидов давать цветную реакцию с биуретовым реактивом. Концентрацию пептидов ("пептонов") определяют путем сравнения интенсивности окраски испытуемого и стандартного растворов.

Реактивы: 1) 2%-й раствор меди сульфата в 9%-м растворе натрия-калия тартрата - реактив А;

Приготовление реактива А. Растворяют 1 г меди сульфата (CuSO4 x 5H2O) в нескольких миллилитрах воды. В этот раствор прибавляют 4,5 г натрия-калия тартрата, предварительно растворенного в 40 мл воды. Объем раствора доводят водой до 50 мл. Раствор годен к употреблению в течение дня.

2) 10%-й раствор натрия едкого;

3) 0,9%-й раствор натрия хлорида;

4) 1%-й стандартный раствор пептона (ГОСТ 13805-76).

Приготовление 1%-го стандартного раствора пептона. Стандартный раствор 1%-го пептона готовят с учетом влажности при растворении навески в 0,9%-м растворе натрия хлорида. Реактив хранят в холодильнике. В качестве консерванта используют мертиолят (1:10000).

Приготовление контрольного раствора. К 5 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида добавляют 0,5 мл 10%-го раствора натрия едкого и 0,5 мл реактива А.

Построение калибровочной кривой. Из стандартного раствора готовят ряд разведений с содержанием пептона от 0,1 до 0,5% на 0,9%-м растворе натрия хлорида с интервалом 0,1%. К 5 мл каждого разведения прибавляют 0,5 мл 10%-го раствора натрия едкого и 0,5 мл реактива А.

Пробы колориметрируют сразу после внесения реактивов на фотоэлектроколориметре (ФЭК) при длине волны 540 нм в кюветах с толщиной слоя 5 мм против контрольного раствора. По показаниям прибора строят кривую зависимости оптической плотности от концентрации пептона. Калибровочную кривую проверяют перед каждым определением.

Подготовка проб. Для анализа используют гидролизаты и питательные среды, разведенные в 10 раз 0,9%-м раствором натрия хлорида.

Ход определения

К 5 мл испытуемого раствора добавляют 0,5 мл 10%-го раствора едкого натрия и 0,5 мл реактива А.

Одновременно готовят контрольную пробу и проводят определение, как описано при построении калибровочной кривой. Концентрацию пептона в испытуемом растворе в процентах вычисляют по калибровочной кривой и производят перерасчет с учетом разведения <*>.

--------------------------------

<*> Методика может быть рекомендована для гидролизатов и питательных сред с определенной цветностью. Показатель оптической плотности среды не должен превышать 0,2 при определении на фотоэлектроколориметре при длине волны 540 нм в кюветах с толщиной слоя 5 мм против воды.

6.8. Определение общего азота с реактивом Несслера

Принцип метода основан на свойстве реактива Несслера давать цветную

реакцию с ионами аммония (NH4 ) , образующимися после минерализации

азотсодержащих органических веществ.

Реактивы: 1) серная кислота концентрированная;

2) водорода перекись. Пергидроль (29-35%) (ГОСТ 10929-76);

3) реактив Несслера (готовый);

4) раствор аммония сернокислого, содержащий 0,05 мг/мл азота.

Приготовление стандартного раствора сернокислого аммония (0,1 мг/мл азота). Из образца аммония сульфата, предварительно доведенного до постоянной массы (в эксикаторе над безводным кальция хлоридом), берут его точную навеску - 0,2357 г и растворяют в мерной колбе (v = 500 мл) в дистиллированной воде, доводя объем раствора до метки. Стандартный раствор хранят в течение 1 года при температуре 4-8 град. C в колбе с притертой пробкой. Перед определением стандартный раствор разводят водой в 2 раза.

Построение калибровочной кривой. В пробирки вносят по 0,1 - 0,2 - 0,3 - 0,4 - 0,5 мл раствора аммония сернокислого (содержание азота от 5 до 25 мкг с интервалом 5 мкг). Объем каждой пробы доводят водой до 9,5 мл, перемешивают, затем прибавляют по 0,5 мл реактива Несслера. Пробы вновь перемешивают, а затем колориметрируют на фотоэлектроколориметре с синим светофильтром (лямбда ~ 400 нм) в кюветах с толщиной слоя 10 мм.

Раствором сравнения служит контрольная проба, содержащая 0,5 мл реактива Несслера в 9,5 мл воды. По показаниям прибора строят кривую зависимости оптической плотности от концентрации азота. Калибровочный график воспроизводят при каждом определении.

Ход определения

Подготовка проб. Для анализа в пробирку пипеткой вносят 1 мл раствора образца, с содержанием общего азота 100-200 мкг <*>.

--------------------------------

<*> При анализе сухой питательной среды, содержащей 5-10% общего азота, готовят 0,2%-й раствор на дистиллированной воде (анализируемая навеска образца С - 2 мг).

При анализе сухого гидролизата, содержащего 12-17% общего азота, готовят 0,1%-й раствор (анализируемая навеска образца С - 1 мг).

Жидкий гидролизат следует развести в 100 раз.

На песчаной бане минерализуют 1 мл исследуемого образца (2 параллельные пробы) с 0,1 мл концентрированной серной кислоты в пробирках со стеклянными колпачками. Параллельно минерализуют контрольную пробу, содержащую 0,1 мл концентрированной серной кислоты. Для ускорения минерализации в охлажденные испытуемые и контрольные пробы периодически добавляют по 1-2 капли пергидроля. Сжигание продолжают до обесцвечивания содержимого пробирок (не менее 10 ч).

К полученным минерализатам добавляют по 8,9 мл дистиллированной воды, предварительно обмыв колпачок, тщательно перемешивают растворы. На колориметрирование отбирают по 1 мл раствора минерализата (10-20 мкг азота), добавляют 8,5 мл дистиллированной воды, перемешивают, а затем - по 0,5 мл реактива Несслера. Пробы перемешивают и колориметрируют на фотоэлектроколориметре с синим светофильтром (лямбда ~ 400 нм) в кюветах с толщиной слоя 10 мм. Раствором сравнения служит раствор, приготовленный аналогично образцу.

Содержание общего азота в препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:

Для сухого образца (сухой гидролизат, сухая питательная среда):

A x 10 x 100 A

X = -------------- = -,

1,0 x C x 1000 C

где:

A - количество азота (мкг), рассчитанное по калибровочному графику;

10 - разведение минерализата;

100 - коэффициент пересчета в проценты;

1,0 - количество анализируемого препарата (мл);

C - анализируемая навеска образца (мг), содержащаяся в 1 мл раствора образца;

1000 - коэффициент пересчета микрограммов в миллиграммы.

Для жидкого образца (жидкий гидролизат):

B x 10 x 100 x 100 В

X = ------------------- = --,

1,0 x 1,0 x 1000000 10

где:

В - количество азота (мкг), найденное по калибровочному графику;

10 - разведение минерализата;

100 - степень разведения жидкого гидролизата;

100 - коэффициент пересчета (%);

1,0 - количество препарата (мл), взятое для колориметрирования;

1,0 - количество исследуемого образца (мл), взятое для минерализации;

1000000 - коэффициент пересчета (г).

6.9. Определение содержания аминного

азота формольным титрованием

Определение содержания аминного азота в питательных средах проводят методом формольного титрования. Принцип метода основан на блокировании формальдегидом при pH 7,0 свободных аминогрупп и титровании щелочью эквивалентного количества карбоксильных групп. Начало и конец титрования определяют потенциометрически.

Реактивы: 1) натрия гидроксид (0,1 моль/л) или раствор соляной кислоты (0,1 моль/л);

2) натрия гидроксид 10%-й раствор;

3) раствор формалина (40%-й раствор формальдегида) <*> (ГОСТ 1625-75).

--------------------------------

<*> Перед каждым определением pH формалина доводят до pH 7,0 10%-м раствором натрия гидроксида.

Ход определения

В стакан вместимостью 50 мл наливают необходимый объем (А) (подготовка проб см. примечания 1 и 2) анализируемого раствора препарата, содержащего 1,5-5,0 мг аминного азота, и доводят общий объем дистиллированной водой до 20 мл. Электроды потенциометра (см. определение pH) погружают в исследуемый раствор, pH которого доводят до значения 7,0 с помощью раствора натрия гидроксида (0,1 моль/л) или раствора соляной кислоты (0,1 моль/л) <*>.

--------------------------------

<*> В ходе определения электроды должны все время оставаться погруженными в раствор.

К нейтрализованному раствору добавляют 2 мл нейтрального формалина, перемешивают и, не вынимая электроды, титруют содержимое раствором натрия гидроксида (0,1 моль/л) до pH 9,1 <*>. Проводят два параллельных измерения.

--------------------------------

<*> При титровании следует использовать бюретку вместимостью 5 мл.

Содержание аминного азота в исследуемом препарате в процентах (X) вычисляют по следующим формулам.

Для сухого образца:

V x K x 1,4 x 100

X = -----------------,

где:

V - количество раствора натрия гидроксида (0,1 моль/л) в миллилитрах, пошедшее на титрование испытуемой пробы от pH 7,0 до 9,1;

К - поправка к титру раствора натрия гидроксида (0,1 моль/л);

1,4 - количество аминного азота в миллиграммах, эквивалентное 1,0 мл р-ра натрия гидроксида (0,1 моль/л);

С - анализируемая навеска сухого препарата в миллиграммах, содержащаяся в титруемом объеме "А";

100 - коэффициент пересчета миллиграммов в проценты.

Примечание 1.

Для сухих образцов (гидролизаты, экстракты, среды (1,5-4,0% аминного азота) - "А" = 10 мл 1%-го р-ра (анализируемая навеска образца "С" составляет соответственно 100 мг)).

Для жидкого образца:

V x K x 1,4 x 100

X = -----------------,

А x 1000

где:

А - количество жидкого образца (мл), взятого на анализ;

100 - коэффициент пересчета миллиграммов в проценты;

1000 - коэффициент пересчета миллиграммов в граммы.

Примечание 2:

- для жидких гидролизатов низкой степени расщепления (0,1-0,2% аминного азота) "А" = 3 мл;

- для жидких гидролизатов средней степени расщепления (0,3-0,6% аминного азота) "А" = 1 мл;

- для жидких гидролизатов высокой степени расщепления (0,7-1,3% аминного азота) "А" = 0,5 мл;

- для жидких питательных сред (0,08-0,14% аминного азота) "А" = 10 мл;

- для готовых плотных агаровых сред "А" = 3 мл препарата, расплавленного в кипящей водяной бане.

6.10. Определение содержания хлоридов

аргентометрическим методом

(в пересчете на натрия хлорид)

Метод основан на определении ионов хлора после окисления белков перманганатом калия в кислой среде в присутствии нитрата серебра, избыток которого оттитровывают раствором роданида аммония.

Реактивы: 1) серебро азотнокислое - 0,01 н раствор (готовят, используя

стандарт-титр (фиксанал)) <*>;

2) кислота азотная концентрированная;

3) аммония роданид - 0,1 моль/л раствор (готовят, используя

стандарт-титр фиксанал) <*>;

4) калий марганцовокислый - насыщенный раствор;

5) глюкоза безводная, не содержащая Cl ;

6) железоаммиачные квасцы, насыщенный раствор (к 40%-му р-ру на холоде

прибавляют по каплям концентрированную азотную кислоту до перехода

коричневой окраски в желтовато-зеленую). Хранить в защищенном от света

месте.

--------------------------------

<*> Ex tempore готовят 0,01 моль/л раствор разведением 0,1 моль/л раствора (1:10).

Ход определения

Для анализа используют объем "В, мл" жидкого образца.

Подготовка проб.

Жидкие питательные среды, содержащие 0,5-0,9% NaCl, "В" = 0,2 мл.

Для жидких гидролизатов (1-10% NaCl), пробу развести в 10 раз дистиллированной водой:

- при содержании NaCl 1-5% - "В" = 0,5 мл;

- при содержании NaCl 6-10% - "В" = 0,2 мл.

Для сухих гидролизатов (1-10% NaCl) готовят 10%-й раствор на дистиллированной воде:

- при содержании NaCl в образце 1-5% (анализируемая навеска образца "С" = 50 мг) "В" = 0,5 мл;

- при содержании NaCl в образце 6-10% (анализируемая навеска образца "С" = 20 мг) "В" = 0,2 мл.

Для сухих питательных сред, содержащих 10-30% NaCl, готовят 1,0%-й раствор на дистиллированной воде и берут на анализ объем "В" = 0,5 мл (анализируемая навеска образца "С" = 5 мг).

В коническую колбу вместимостью 50 мл вносят 10 мл дистиллированной воды, а затем 0,2 мл препарата, содержащего 0,5-1,0 мг/мл (оптимальные значения содержания в питательных средах) натрия хлорида, прибавляют 5 мл р-ра азотнокислого серебра (0,01 моль/л) и 1 мл концентрированной азотной кислоты. Смесь осторожно нагревают на асбестовой сетке до кипения. К испытуемому раствору прибавляют по каплям насыщенный раствор калия марганцовокислого до бледно-розового окрашивания, не исчезающего в течение 5 мин. Затем прибавляют на кончике скальпеля сухую глюкозу (около 10 мг) до исчезновения окраски. После охлаждения раствора избыток ионов серебра титруют раствором аммония роданида (0,01 моль/л) до образования розового окрашивания (индикатор - железоаммонийные квасцы - насыщенный ~ 40% р-р), определяя объем, пошедший на титрование.

Параллельно проводят контрольный опыт - в качестве образца берут 0,2 мл дистиллированной воды.

Содержание натрия хлорида в жидких препаратах в процентах (X) вычисляют по формуле:

(А - Д) x К x 0,000585 x Р x 100

X = --------------------------------,

где:

А - количество раствора аммония роданида (0,01 моль/л), пошедшего на титрование в контрольном опыте, мл;

Д - количество раствора аммония роданида (0,01 моль/л), пошедшего на титрование испытуемого раствора, мл;

К - поправка к титру раствора аммония роданида;

В - количество испытуемого раствора, мл;

Р - степень разведения жидкого образца (для питательных сред Р = 1, для гидролизатов Р = 10);

0,000585 - количество натрия хлорида, соответствующее 1 мл раствора роданида аммония (0,01 моль/л), г;

100 - коэффициент пересчета в проценты.

Содержание натрия хлорида в сухих препаратах в процентах (X) вычисляют по формуле:

(A - Д) x К x 0,000585 x 100

X = ----------------------------,

где С - навеска образца, мг.

Остальные обозначения см. выше.

6.11. Определение потери в массе при высушивании

Стеклянные бюксы высотой 45 мм и диаметром 28 мм доводят до постоянной массы при температуре 100-105 град. C.

Около 0,15-0,20 г (точная навеска) препарата помещают в бюксы и сушат в сушильном шкафу при температуре (100-105) град. C в течение 2 ч. После чего бюксы с закрытыми крышками выдерживают в эксикаторе в присутствии кальция хлорида безводного в течение 30-40 мин. до полного охлаждения и взвешивают <*>.

--------------------------------

<*> Анализ проводят при температуре (20 +/- 5) град. C и относительной влажности воздуха 40-80%.

Расчет массовой доли влаги в процентах проводят по разности масс до и после высушивания.

6.12. Определение сухого остатка

Принцип метода основан на удалении влаги путем выпаривания исследуемого раствора и последующем высушивании остатка до постоянного веса.

Подготовка проб. Для анализа отбирается 1 мл исследуемого образца.

Ход определения

Анализ проводят во взвешенной и доведенной до постоянной массы фарфоровой чашке (d = 7 см), куда наливают 1 мл исследуемого образца и выпаривают его на кипящей водяной бане (при постоянном помешивании препаратов, содержащих агар). После испарения жидкости чашку ставят в сушильный шкаф (100 +/- 5) град. C на 2 ч, охлаждают в эксикаторе и взвешивают на аналитических весах.

Содержание сухого остатка (%) рассчитывают по формуле:

(А - Д) x 100

X = -------------,

где:

А - вес чашки (г) с исследуемым образцом после высушивания;

Д - вес чашки;

100 - коэффициент пересчета в проценты;

В - объем анализируемого образца (мл).

6.13. Определение стерильности готовых к применению сред

Определение стерильности готовой питательной среды проводят визуально путем просмотра 3-5% каждой партии после инкубации в термостате при температуре 37 град. C в течение 2-14 сут. в зависимости от типа среды.

Обнаружение после инкубации помутнения жидкой (полужидкой) среды или появление на чашках (пробирках) более 2-4 колоний свидетельствует о нестерильности среды, и вся исследуемая среда подлежит повторному контролю на удвоенном количестве образцов. При повторном подтверждении результата среда подлежит уничтожению.

Определение стерильности добавок питательных сред (кровь, сыворотка крови) проводят методом прямого посева.

Пробу препарата объемом 1 мл высевают в 2 пробирки, содержащие по 20,0 мл тиогликолевой среды, одну из которых инкубируют при 30-35 град. C для выявления аэробных и анаэробных микроорганизмов, а другую при 20-25 град. C для выявления грибов и бактерий с оптимумом роста в данном температурном режиме. Продолжительность инкубации посевов 14 сут. В течение всего срока проводится их периодический просмотр.

В случае помутнения питательной среды после внесения в нее испытуемого препарата следует в интервале от 3 до 7 сут. после посева сделать пересев приблизительно по 0,5 мл на две пробирки, содержащие 10,0 мл тиогликолевой среды. Все пробирки выдерживают после пересева при соответствующих температурах до окончания инкубации (14 сут.) со дня первичного посева.

Среды, приготавливаемые из сухих препаратов и (или) разливаемые в лаборатории в чашки (пробирки), контролируют на чистоту розлива (см. "Подготовка образцов питательных сред для контроля. Контроль чистоты розлива").

6.14. Определение прочности студня агаровых сред

по Валенту

Прочность студня среды. Сущность метода заключается в определении массы нагрузки, необходимой для разрушения структуры образца. Определение проводят с помощью прибора Валента (рис. 1 - не приводится).

Примечание.

Подготовка оборудования:

- сборные цилиндры (стаканчики) свинчиваются так, чтобы центральная выпуклость диска - отметка - была обращена кверху;

- в приборе Валента проверяются: линии отвеса и устойчивость прибора на всех регулировочных ножках. В сборник при помощи воронки насыпается песок, на шпильку нажимного штока надевается приемник песка.

Время от времени проверяется скорость истечения песка за 1 с. Для этого на шпильку давящего штока надевается большой приемник (вес известен) и песок из сборника выпускается ровно 30 с. Шнур надо держать туго натянутым. Скорость истечения песка в приборе Валента подгоняется с помощью винта к 10,4 - 10,8 г/с, после чего винт закрепляется контргайкой. Песок из сборника выпускается ровно 30 с. Приемник с песком взвешивается. Масса песка (без приемника, деленная на 30) дает скорость истечения песка в 1 с. Определение проводят не менее 3 раз и рассчитывают средний показатель;

- песок, применяемый в приборе, приготавливается из кварцевого путем промывки его разбавленной соляной кислотой (12 ч), водой, высушивания и отсева на почвенных ситах. Для работы используется фракция с диаметром частиц более 0,5 мм.

Подготовка проб.

Для готовых препаратов. Готовую агаровую среду выдерживают в кипящей водяной бане до полного расплавления студня, осторожно помешивая круговыми движениями, и немедленно разливают в 3 сборных цилиндра по 30 мл.

Для сухих препаратов. Для приготовления образца студня к навеске агаровой среды по прописи <*> (с точностью до 0,01 г) в сухой конической или плоскодонной колбе порциями при энергичном взбалтывании прибавляют 100 мл дистиллированной воды, смывая частицы препарата со стенок колбы. Колбу закрывают ватной пробкой и при осторожном нагревании жидкость доводят до кипения. Операцию повторяют 3 раза (до 3-кратного вспенивания). Признаком растворения будет появление крупно-пузырчатой пены; 100 мл полученного горячего раствора агаровой среды (не ниже 80 град. C) немедленно разливают в 3 сборные цилиндра по 30 мл.

--------------------------------

<*> Для сред с низкой прочностью (100-250 г) берут 2-3-кратную навеску.

Ход определения

Цилиндрики с горячей средой ставят в горизонтально установленный сосуд с плоским дном, наполненный водой, уровень которой немного ниже уровня раствора в цилиндриках, и выдерживают 20 мин. при 20 град. C, поддерживая температуру добавлением в сосуд при перемешивании холодной или теплой воды. Через 20 мин. цилиндрики с образовавшимся студнем вынимают и, держа их наклонно (верхним краем к листу бумаги), отвинчивают дно. Нажимом вбок сдвигают вкладной диск и, увеличивая величину наклона, дают столбику студня выскользнуть на фильтровальную бумагу <*>. После чего его переносят на основание прибора Валента, установленного с помощью уровня.

--------------------------------

<*> Поверхность столбика студня оберегать от повреждения!

Левой рукой поднимают нажимной шток прибора с насадкой над серединой столбика студня, который, в свою очередь, подводят правой рукой. Затем одновременно, осторожно опуская левой рукой шток на столбик студня, правой натягивают до отказа кольцо шнура перекрывающего механизма и насыпают песок в приемник до тех пор, пока насадка не начнет разрушать столбик студня.

Как только насадка прорвет пленку столбика студня, немедленно отпускают кольцо шнура. Снимают приемник песка и взвешивают его с точностью до 1,0 г. Полученная сумма масс песка с приемником и штока с насадкой и будет выражать прочность исследуемого препарата по Валенту в граммах.

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое значений результатов трех параллельных измерений. Допустимое отклонение измерений от средней величины не должно превышать 10%.

6.15. Определение температуры застудневания

Метод основан на визуальном определении момента застудневания раствора агара.

Подготовка проб. Навеска препарата из расчета приготовления 150 мл среды растворяется при кипячении.

Ход определения

Во флакон со 150 мл раствора питательной среды (приготовленной в концентрации, указанной на этикетке флакона с сухой средой) погружают термометр, по которому фиксируют температуру перехода содержимого флакона в студень.

Температура застудневания для плотной агаризованной среды должна быть не ниже 30 и не выше 37 град. C.

6.16. Определение температуры плавления студня среды

Метод основан на визуальном определении точки плавления агарового студня.

Подготовка проб. Для определения температуры плавления плотных питательных сред используют раствор среды, приготовленный для определения температуры застудневания.

Ход определения

Две пробирки (ГОСТ 25336-82Е) объемом 20 мл заполняют приблизительно до половины их высоты раствором среды и закрывают заранее подобранными резиновыми пробками. Для застудневания раствора пробирки оставляют при температуре около 20 град. C не менее чем на 3 ч, после чего пробирки со студнем помещают в стакан с водой, имеющей температуру 60 град. C, заменяя пробки на ватно-марлевые. Стакан с пробирками и термометром, опущенным в пробирку с водой, помещают в баню (60 град. C), которую нагревают таким образом, чтобы скорость повышения температуры воды в стакане не превышала 0,5 град. C в минуту.

Через каждый градус повышения температуры одну из пробирок вынимают из стакана и, наклонив ее, наблюдают, не расплавился ли студень. Температуру, при которой содержимое пробирки полностью перейдет в жидкое состояние, отмечают как температуру плавления среды. За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, допустимые расхождения между которыми не должны превышать 1 град. C.

Температура плавления плотной агаризованной среды не должна быть ниже 80 град. C.

6.17. Определение продолжительности плавления студня среды

Полное расплавление студня учитывают визуально.

Две бутылки с готовым препаратом выдерживают в кипящей водяной бане, периодически осторожно перемешивая содержимое. Показатель определяют от момента закипания воды до полного расплавления агара. Среда во флаконах (бутылках) должна выглядеть однородной, жидкой, без сгустков агара.

Продолжительность плавления студня среды должна быть не более 1 ч.

6.18. Определение срока годности

Для определения сроков годности питательных сред можно использовать метод выемок проб, а для сухих питательных сред также метод "ускоренного старения".

Метод выемок проб основан на изучении стабильности показателей качества препарата при хранении его в течение определенного срока <*> при определенной температуре. С этой целью на хранение при соответствующей температуре (18-25 град. C или 2-8 град. C) закладываются образцы препарата.

--------------------------------

<*> Проводится не менее 5 измерений ("выемок") по всем показателям качества.

Срок годности среды вычисляется как время хранения препарата, при котором все показатели его качества не изменяются или находятся в пределах допустимых значений, минус 3 месяца.

Сроки годности для большинства сухих питательных сред от 2 до 5 лет, готовых - 1 год.

Для сокращения времени изучения стабильности свойств сухих питательных сред может быть использован метод "ускоренного старения".

Метод "ускоренного старения" используют для определения сроков годности сухих микробиологических сред и питательных основ, в составе которых могут быть как синтетические ингредиенты, так и компоненты, получаемые из природного сырья (белковые основы, витамины, аминокислоты, агары и т.д.).

Данный метод заключается в выдерживании испытуемой среды (питательной основы) при температурах, превышающих среднюю температуру хранения, для ускорения протекающих в них физико-химических процессов. По результатам, полученным методом "ускоренного старения", можно установить температуру хранения, обеспечивающую заданный срок годности. Пересчет срока экспериментального хранения (годности) на срок хранения (годности) при стандартных условиях (давление 101,325 кПа, температура 20 град. C, относительная влажность воздуха 60%) проводят по следующему уравнению:

t - 20

-------

С = К x С = 2 x С ,

э э

где:

К - коэффициент соответствия срока экспериментального хранения при

повышенной температуре сроку хранения при стандартной температуре, равной

20 град. C <*>;

2 - принятое значение температурного коэффициента скорости химических

реакций;

t - температура экспериментального хранения;

С - срок экспериментального хранения;

С - срок хранения (годности) при стандартных условиях.

--------------------------------

<*> Значения коэффициентов соответствия К для различных температур

экспериментального хранения t при температурном коэффициенте скорости

химической реакции, равном 2 (табл.).

Таблица

┌────────┬────────┬────────┬─────────┬────────┬─────────┬────────┐

│ t , │ 25 │ 30 │ 35 │ 40 │ 45 │ 50 │

│ э │ │ │ │ │ │ │

│град. C │ │ │ │ │ │ │

├────────┼────────┼────────┼─────────┼────────┼─────────┼────────┤

│ К │ 1,4 │ 2,0 │ 2,8 │ 4,0 │ 5,7 │ 8,0 │

└────────┴────────┴────────┴─────────┴────────┴─────────┴────────┘

7. Оценка специфической активности питательных

сред по биологическим показателям

Набор показателей, необходимых для определения специфической активности каждой среды, определяется ее назначением (см. Прилож. 1).

7.1. Подготовка образцов питательных сред для контроля

Готовые к применению среды. Работа должна быть проведена с соблюдением правил асептики. Перед использованием снять алюминиевый колпачок с бутылки, заменить резиновую пробку на стерильную ватно-марлевую.

Жидкую среду разлить в стерильные пробирки <*>.

--------------------------------

<*> Объем среды, разливаемой в пробирки, указывается в инструкции по применению обычно составляет:

- для бульонов - 5 мл, 10 мл (реже 4 мл, 9 мл) (в зависимости от объема вносимого инокулята);

- для агаров - 5 мл (объем агаров, разливаемый в чашки Петри, зависит от размера чашки (d = 90 или 100 мм) и должен соответствовать толщине агарового слоя - 3-4 мм (реже 5-6 мм) согласно инструкции по применению).

Бутылку с агаром выдержать в кипящей водяной бане до полного расплавления студня, охладить до 45-50 град. C (для уменьшения количества конденсата, образующегося при застывании агара) и разлить в стерильные пробирки или чашки Петри.

Сухие среды. Готовят в соответствии с инструкцией по применению среды. При необходимости стерилизуют автоклавированием <*>.

--------------------------------

<*> Некоторые селективные бульоны (среды Кода, Лейфсона, SDS-бульон) не стерилизуют, а лишь доводят до кипения.

Бульоны фильтруют через бумажный фильтр и разливают в стерильные пробирки.

Агаровые среды фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в стерильные пробирки, флаконы и другие емкости.

РЕЖИМЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ СРЕД

Режим стерилизации	Среды
121 град. C в течение 15 мин.	Тиогликолевая среда, МПА, МПБ, бульон Хоттингера, агар Хоттингера, СПА, СПБ
120 град. C в течение 30 мин.	0,9%-й раствор NaCl
112 град. C в течение 20 мин.	Среды, содержащие углеводы (среды Гисса), витамины, молоко, желатин
110 град. C в течение 30 мин.	Среда Тароцци
100 град. C в течение 15 мин.	Среды с мочевиной

Горячую среду охлаждают до 45-50 град. C и разливают в стерильные чашки Петри. При необходимости пробирки с агаровыми средами скашивают. Разлитые в чашки Петри агаровые среды оставляют при 18-25 град. C для застывания в течение 15-20 мин., после чего, соблюдая правила асептики, подсушивают в открытом виде вверх дном <*> при температуре (37 +/- 1) град. C в течение 40-60 мин.

--------------------------------

<*> Возможно подсушивание закрытых чашек со средой в термостате при 37 град. C в течение 10-12 ч.

7.1.1. Контроль чистоты розлива

В зависимости от объема розлива необходимо проверять 1-2 чашки (пробирки) или 1% чашек или пробирок в начале и столько же в конце процесса розлива среды. Чашки (пробирки) следует инкубировать не менее 18 ч при 37 град. C или в условиях инкубирования, рекомендуемых для каждой среды.

7.1.2. Хранение приготовленных сред

Готовые к применению стерильные среды, разлитые в чашки (пробирки), хранят при 2-8 град. C в течение 5-30 дней согласно инструкции по применению <*> (см. раздел "Определение срока годности").

--------------------------------

<*> Некоторые среды можно хранить при температуре 18-25 град. C в защищенном от света месте, другие должны быть использованы в день приготовления. При необходимости стерильные питательные среды, разлитые во флаконы объемом не менее 150 мл, можно хранить при 2-8 град. C до 2-х мес., повторно расплавляя перед использованием. Исключение составляют среды, в инструкциях по применению которых содержится предупреждение о том, что стерильная среда во флаконах не подлежит повторному расплавлению.

Определение срока хранения приготовленных сред

Среду готовят к использованию (вносят добавки, разливают в пробирки, чашки Петри и т.д.), помещают в определенные условия (t град., свет) и устанавливают, в течение какого времени и при каких условиях среда сохраняет свой искомый внешний вид (цвет, прозрачность, отсутствие признаков высыхания), pH и специфическую активность.

7.2. Тест-штаммы

Для проведения контроля качества БПС необходимо иметь коллекцию типовых культур, которые могут быть получены из следующих специализированных коллекций:

- Государственная коллекция патогенных микроорганизмов Государственного института стандартизации и контроля (ФГУН ГИСК им. Л.А.Тарасевича Роспотребнадзора);

- Всероссийская коллекция промышленных микроорганизмов (ВКПМ);

- Всесоюзная коллекция непатогенных микроорганизмов (ИБФМ);

- Из международных коллекций:

- Американская коллекция типовых культур (АТСС);

- Английская национальная коллекция типовых культур (NCTC);

- Другие коллекции (см. Прилож. 3).

Изоляты микроорганизмов, выделенные из клинического материала и используемые для контроля, должны по свойствам соответствовать микроорганизмам признанных национальных и международных коллекций.

Полученные лабораторией музейные тест-штаммы и свежевыделенные культуры хранят при температуре 2-8 град. C в лиофилизированном состоянии или на среде хранения (см. "Хранение культур").

Набор тест-штаммов, необходимый для контроля качества каждой питательной среды, определяется ее назначением, т.е. должен состоять как правило, из нескольких штаммов, моделирующих натурные условия применения среды. Применяемые для контроля тест-штаммы (из лиофилизированного состояния или со среды хранения) не должны проходить более 3-х последовательных пересевов на питательные среды, а свежевыделенные штаммы (при отсутствии музейных для новых возбудителей) с момента выделения и получения их в виде чистых культур не должны проходить более 3-5 последовательных пересевов.

Используемые для контроля БПС тест-штаммы должны быть типичными по культурально-морфологическим, биохимическим и серологическим свойствам, а также проверяться на отсутствие диссоциации.

Тест-штаммы, необходимые для контроля наиболее распространенных питательных сред (см. Прилож. 2), могут быть получены из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ФГУН ГИСК им. Л.А.Тарасевича.

7.2.1. Подготовка тест-штаммов для контроля

7.2.1.1. Восстановление культур

Восстановление культур (из лиофилизированного состояния, со среды хранения) проводят с использованием плотной и жидкой <*> питательных сред, принятых для определенной группы микроорганизмов.

--------------------------------

<*> В случае отсутствия первичного роста культуры на плотной среде необходимые исследования проводят с бульонными культурами.

Микроорганизмы после I пассажа (пересева) обладают пониженной жизнеспособностью, в связи с чем рекомендуется использовать для работы культуру II или III пассажа.

Для большинства микроорганизмов используют сухие питательные среды (СПБ, СПА, ГРМ-бульон, ГРМ-агар) либо готовые к применению коммерческие препараты, имеющие pH 7,2 +/- 0,2 (МПА, МПБ, агар и бульон Хоттингера), а также питательные среды лабораторного приготовления:

- для стрептококков, энтерококков - МПА с 0,2%-й глюкозой, pH 7,6;

- для коринебактерий - СПА с сывороткой (20%) pH 7,6;

- для анаэробов - среда Тароцци, pH 7,0 +/- 0,2;

- для бифидобактерий - среда Блаурокка pH 7,05 +/- 0,25.

Питательные среды лабораторного приготовления

Бульон Хоттингера:

гидролизат Хоттингера 20,0 г

натрия хлорид 5,0 г

вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 1 л

pH 7,2 +/- 0,2.

Приготовление. Гидролизат Хоттингера смешивают с дистиллированной водой из расчета содержания в 1 л среды 20 г сухих веществ, вносят такое количество натрия хлорида, чтобы содержание его в среде составляло 5 г/л. Устанавливают pH 8,0-8,2 с помощью 10%-го р-ра гидроксида натрия, кипятят в течение 2-3 мин., фильтруют через фильтровальную бумагу, устанавливают pH 7,2-7,4 с помощью 5%-го р-ра соляной кислоты. Разливают по 10 мл в стерильные пробирки и стерилизуют автоклавированием при температуре 121 град. C в течение 15 мин. Бульон годен к применению в течение 2-х месяцев при условии хранения при температуре 2-8 град. C.

Используется гидролизат Хоттингера (панкреатический гидролизат мясного фарша), предварительно освобожденный от балластных белков, удаляемых подкислением до pH 4,5-4,7 раствором соляной кислоты (соотношение с водой 1:1), последующего кипячения в течение 1-2 мин. и фильтрации через ватно-марлевый фильтр.

Агар Хоттингера:

гидролизат Хоттингера 20,0 г

натрия хлорид 5,0 г

агар микробиологический 13,0-20,0 г

pH 7,2 +/- 0,2.

Приготовление. Гидролизат Хоттингера смешивают с дистиллированной водой из расчета содержания в 1 л среды 20 г сухих веществ, вносят такое количество натрия хлорида, чтобы содержание его в среде составляло 5 г/л. Устанавливают pH 8,0-8,2 с помощью 10%-го р-ра гидроксида натрия, кипятят при постоянном помешивании в течение 3-5 мин., фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH 7,2-7,4 с помощью 5%-го р-ра соляной кислоты. Разливают по 5 мл в стерильные пробирки и стерилизуют автоклавированием при температуре 121 град. C в течение 15 мин. Готовый агар Хоттингера годен к применению в течение 2 месяцев при условии хранения при температуре 2-8 град. C.

Среда Тароцци:

гидролизат Хоттингера 25,0 г

глюкоза 5,0 г

натрия хлорид 5,0 г

агар микробиологический 1,0 г

фарш мясной (на 1 пробирку с 10 мл среды) 0,3-0,5 г

вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 1 л

pH 7,0 +/- 0,2.

Приготовление: гидролизат Хоттингера смешивают с дистиллированной водой из расчета содержания в 1 л среды 25,0 г сухих веществ (см. "Определение сухих веществ"), затем вносят такое количество хлорида натрия, чтобы содержание его в среде составляло 5 г/л, устанавливают pH 8,0-8,2 с помощью 1%-го раствора гидроокиси натрия. Смесь кипятят до расплавления агара в течение 2-3 мин., фильтруют и устанавливают pH 7,4-7,6 с помощью 5%-го раствора соляной кислоты. Разливают по 10 мл в пробирки, содержащие мясной фарш, и стерилизуют автоклавированием при температуре 110 град. C в течение 30 мин. Готовая среда годна к применению в течение месяца со дня приготовления при условии хранения ее при температуре 2-8 град. C.

Приготовление мясного фарша. Мясной фарш заливают питьевой водой в соотношении 1:5 (по объему) и кипятят в течение 1-2 мин., затем сливают воду, а фарш промывают водой и отжимают. Фарш заливают дистиллированной водой и повторяют операцию до получения полностью обезжиренного фарша. (В случае использования сырого фарша его предварительно кипятят в воде в течение 30 мин.) Отжатый с помощью ручного пресса и подсушенный на фильтровальной бумаге фарш закладывают в стерильные флаконы, стерилизуют автоклавированием при температуре 120 град. C в течение 30 мин. и хранят при температуре 18-25 град. C.

По мере необходимости фарш раскладывают по стерильным пробиркам (из расчета 0,3-0,5 г на 10 мл среды), стерилизуют автоклавированием при температуре 120 град. C в течение 30 мин. и выдерживают при температуре 37-45 град. C до полного высыхания фарша.

Следует иметь в виду, что при использовании недостаточно обезжиренного и высушенного фарша в среде может наблюдаться опалесценция.

Среда Блаурокка:

печеночный бульон 1 л

пептон сухой ферментативный для

бактериологических целей (ГОСТ 13805-76) 10,0 г

лактоза 10,0 г

натрий хлористый 5,0 г

цистин (ТУ 6-09-235-80) 0,1 г

агар микробиологический 0,75 г

pH 7,05 +/- 0,25.

Для приготовления печеночного бульона 500 г говяжьей печени кипятят в 1 л дистиллированной воды в течение 2 ч, после фильтрации через марлевый фильтр количество отвара доводят до 1 л дистиллированной водой.

Восстановление аэробов

I пассаж

Лиофилизированные культуры из ампул или со среды хранения пересевают:

- со среды хранения культуру штамма бактериологической петлей переносят в пробирку с питательным бульоном, перемешивают до получения однородной микробной взвеси, 2-3 капли которой затем пастеровской пипеткой высевают в пробирку и на чашку Петри (ГОСТ 25336-82Е) с питательным агаром. Пробирку обкатывают, а на чашке Петри посевной материал распределяют шпателем методом истощения для получения отдельных колоний;

- ампулу с лиофилизированной культурой вскрывают согласно инструкции, вносят в нее пастеровской пипеткой 0,4-0,6 мл питательного бульона или 0,9%-го раствора натрия хлорида, перемешивают до получения однородной микробной взвеси и этой же пипеткой засевают в пробирку и на чашку Петри с питательным агаром.

Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) град. C в течение 18-20 ч <*>.

--------------------------------

<*> Возможно предварительное подращивание культуры в питательном бульоне в течение (4,0 +/- 0,5) ч до посева на питательный агар.

Выросшую на питательном агаре культуру каждого тест-штамма проверяют визуально на чистоту роста (отсутствие колоний других микроорганизмов) и отсутствие диссоциации. В случае необходимости проводят изучение культурально-морфологических и биохимических свойств. Тест-штаммы должны находиться в типичной для данного микроорганизма форме. При обнаружении более 25% полиморфных колоний культура не может быть использована для контроля БПС.

II пассаж

Отдельную типичную колонию культуры I пассажа переносят в пробирку с питательным бульоном, перемешивают и пастеровской пипеткой высевают в 2-3 пробирки и чашку Петри с питательным агаром.

После инкубации посевов в течение 18-20 ч при температуре (37 +/- 1) град. C выросшие культуры тест-штаммов проверяют визуально на чистоту роста и используют для контроля среды.

Восстановление анаэробов

I пассаж

Лиофилизированную культуру из ампул или со среды хранения, пересевают в пробирки (посевной материал вносят в нижнюю часть пробирки) с предварительно регенерированной <*> средой Тароцци и осторожно перемешивают <**>.

--------------------------------

<*> Регенерацию среды осуществляют перед посевом путем выдерживания пробирок со средой в кипящей водяной бане в течение 10-15 мин. и последующего быстрого охлаждения в воде.

<**> При работе с анаэробной культурой перемешивание осуществляют с помощью пипетки; во избежание аэрации пипетку не вынимают из жидкости и содержимое из пипетки не выдувают до конца.

Посевы инкубируют в течение 24-48 ч при температуре (37 +/- 1) град. C до отчетливо видимого роста культуры в виде диффузного помутнения среды с четко выраженной прозрачной зоной. Для получения споровой культуры на среде хранения время инкубации увеличивают до 48 ч, а затем высевают на споровую среду хранения по п. 7.2.2.

II пассаж

Культуру пересевают в 2-3 пробирки со средой Тароцци, а для контроля чистоты культуры - в пробирку со скошенным питательным агаром <*> (агар Хоттингера, СПА с 0,5% глюкозы).

--------------------------------

<*> Рост должен отсутствовать.

После инкубации посевов в течение 17-19 ч при температуре (37 +/- 1) град. C выросшую на среде Тароцци культуру используют для контроля свойств среды.

7.2.1.2. Контроль тест-штаммов на отсутствие диссоциации

Проверка тест-штаммов на отсутствие диссоциации проводится по следующим тестам:

а) визуальный просмотр колоний на чашках и под микроскопом в "проходящем" свете;

б) проба кипячением 2 млрд. микробных клеток (выращенных на плотной среде) в физиологическом растворе на водяной бане в течение 1 ч. Взвесь должна быть гомогенной;

в) эмульгирование культуры на стекле в 0,9 и в 4,0%-м растворах NaCl, а также в растворе трипофлавина 1:1000 (для культур, не содержащих поверхностных К-антигенов). Культура не должна образовывать хлопьевидный осадок;

г) реакция агглютинации специфическими сыворотками или в развернутой реакции агглютинации с неадсорбированными сыворотками. Реакция агглютинации должна быть не менее чем на 3+ при отрицательном контроле в растворе натрия хлорида.

7.2.1.3. Приготовление рабочей культуры и посев

Восстановленные культуры тест-штаммов II пассажа используют для

контроля БПС. В качестве инокулята может быть использована одна

бактериологическая петля (d = 2 мм) культуры, выросшей на плотной

питательной среде, или по 0,1; 0,5; 1,0 мл или 1 бак. петле из суспензии

культуры. Используя стерильный 0,9%-й раствор натрия хлорида, готовят

взвесь культуры, оптическая плотность которой должна соответствовать 10 ед.

по стандартному образцу мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича (ОСО-42-28-85

П-соответствующего года выпуска) <*>. Из полученной суспензии готовят

-3 -8

10-кратные разведения (10 - 10 ) путем последовательного переноса 0,5 мл

взвеси культуры в пробирки с 4,5 мл стерильного 0,9%-го раствора натрия

хлорида (или 1 мл микробной взвеси и 9 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида).

--------------------------------

<*> Отраслевой стандартный образец мутности (ОСО-42-28-85 П)

выпускается ФГУН ГИСК им. Л.А.Тарасевича для визуального определения

мутности бактерийных взвесей методом сравнения. Мутность стандарта, равная

10 единицам мутности, эквивалентна 10 международным единицам мутности,

которые ориентировочно соответствуют следующим концентрациям клеток в 1 мл:

0,93 x 10 клеток/мл для микробов кишечной группы;

11,0 x 10 клеток/мл для микробов коклюшной группы;

1,7 x 10 клеток/мл для микробов бруцеллезной группы;

2,2 x 10 клеток/мл для холерного вибриона;

5,0 x 10 клеток/мл для туляремийных микробов.

Проводить измерения с помощью ОСО необходимо при температуре от 10 до 30 град. C. Для приготовления микробной взвеси обычно пользуются 18-20-часовыми микробными культурами, выращенными на скошенном мясо-пептонном агаре или другой плотной среде. Сравнение степени мутности в опытной и эталонной пробирках производят визуально.

В процессе разведения перенос взвеси в следующую пробирку производят со сменой стерильной пипетки вместимостью 1 мл (ГОСТ 29227-91) (2 класс точности).

Для полуколичественной или качественной оценки свойств среды и

определения продуктивности целевого микроорганизма следует использовать

концентрацию суспензии, обеспечивающую от 10 до 100 КОЕ на чашку или

-5 -7

пробирку (разведения 10 - 10 ).

Для оценки селективности на чашку или в пробирку высевается по 0,1 или

-5

1,0 мл суспензии нецелевого микроорганизма из разведения не более 10 .

Посев

В пробирки с бульоном культуру вносят стерильной пипеткой, с последующим перемешиванием содержимого в закрытой пробирке <*>.

--------------------------------

<*> При посеве анаэробов избегать интенсивной аэрации.

В пробирки с полужидким агаром культуру вносят стерильной пипеткой в столбик среды без дальнейшего перемешивания.

В пробирки с плотным агаром культуру вносят бактериологической петлей уколом в столбик среды, не доводя до дна пробирки, или штрихом на поверхность, микробную взвесь в пробирках со скошенным агаром распределяют путем обкатывания.

На чашки с агаром стерильной пипеткой вносят по 0,1 мл суспензии соответствующего разведения, затем с помощью стерильного шпателя равномерно распределяют суспензию по поверхности, пока она не адсорбируется агаром, либо по 1 мл - обкатыванием.

Посевы помещают в соответствующие условия инкубации.

Инкубация

Температура <*>, время <**> и другие условия инкубации определяются потребностями тест-штаммов, необходимыми для их оптимального роста, а также особенностями питательной среды.

--------------------------------

<*> Для большинства микроорганизмов температура инкубации (37 +/- 1) град. C, для грибов - 20-25 град. C.

<**> Минимальное время инкубации, достаточное для выявления микроорганизмов (выражается в часах) после посева культур.

7.2.2. Хранение тест-штаммов

После восстановления культуру лиофильно высушивают в большом количестве ампул. Лиофилизированные культуры необходимо хранить при температуре от 2 до 8 град. C. Жизнеспособность их сохраняется не менее 10 лет. Хранение штаммов при температуре от -30 до -69 град. C увеличивает этот срок до 30 лет. Транспортирование допускается при температуре до 25 град. C в течение 14 суток.

При необходимости восстановленную культуру пересевают на среду хранения.

Среды хранения

Для большинства аэробов

1. Среда Романова:

гидролизат казеина панкреатический 8,0 г

натрия хлорид 5,0 г

агар микробиологический 5,0-10,0 г <*>

вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 1 л

pH 7,2 +/- 0,2.

--------------------------------

<*> Варьирование величины связано с различной прочностью студня агара. Прочность студня готовой среды должна быть (175 +/- 18) г.

Разлить по 5 мл в пробирки, стерилизовать автоклавированием при температуре 121 град. C в течение 15 мин.

или 2. Питательная среда следующего состава:

питательный бульон, сухой (СПБ) 15,0 г

или ГРМ-бульон сухой 20,0 г

агар микробиологический (ГОСТ 17206-96) 3,0 г

вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72) 1 л

pH 7,2 +/- 0,2.

Разлить по 5 мл в пробирки, стерилизовать автоклавированием при температуре 121 град. C в течение 15 мин.

Для энтерококков, стрептококков, коринебактерий

1. 1%-й агар Мартена

пептон Мартена 0,5 л

мясная вода 0,5 л

агар микробиологический (ГОСТ 17206-96) 1,0 г

pH 7,6 +/- 0,1,

с добавлением 12,5% нормальной лошадиной сыворотки или сыворотки крупного

рогатого скота.

Разлить по 10 мл в пробирки, стерилизовать автоклавированием при температуре 121 град. C в течение 15 мин.

Приготовление пептона Мартена. Фарш свиных желудков заливают подогретой до 50 град. C водопроводной водой из расчета: на 1 л воды 300-500 г измельченной массы, добавляют 1% химически чистой соляной кислоты (уд. вес 1,19). Массу хорошо перемешивают и ставят в термостат на 15-18 ч (и более) при 37 град. C. Действие фермента останавливают нагреванием массы в водяной бане при 80 град. C в течение 10 мин. Бутыли тщательно взбалтывают, закрывают ватно-марлевой пробкой и ставят для отстаивания при температуре не выше 12 град. C. Через 7 дней пептон готов к применению. Для консервирования необходимо добавить 20 мл хлороформа на 1 л пептона и закрыть бутыль резиновой пробкой. В таком виде пептон может храниться без стерилизации при комнатной температуре в течение 1 г.

или 2. МПА 0,1%-й полужидкий, pH 7,6 +/- 0,1;

или 3. Сывороточный агар (питательный агар, содержащий 10% лошадиной сыворотки или СКРС) pH 7,6 +/- 0,1.

Для анаэробов

Среда для получения спор ("споровая" среда):

гидролизат казеина неглубокой

степени расщепления ферментативный сухой 15,0 г

глюкоза 2,0 г

натрия хлорид 5,0 г

агар микробиологический 1,0 г

казеин хлоркальциевый (на 1 пробирку с 10 мл среды) 0,3-0,5 г

вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 1 л.

Разлить по 10 мл в пробирки, стерилизовать автоклавированием при температуре 121 град. C в течение 15 мин.

Культуру аэробов, прошедшую 2 пассажа (см. "Восстановление культур"), снимают бактериологической петлей. Затем уколом петли ее вносят в столбик агаровой среды хранения.

При недостаточном количестве посевного материала (энтерококки, стрептококки, коринебактерии) бульонную культуру пастеровской пипеткой можно засеять на среду Мартена.

Посевы инкубируют в течение 24 ч при температуре (37 +/- 1) град. C. Пересевы со среды хранения на питательный бульон, питательный агар и вновь на среду хранения проводят через каждые 3 мес., но не более 4 раз.

Культуру анаэробов, прошедшую 2 пассажа (см. "Восстановление культур"), со среды Тароцци, соблюдая правила асептики, переносят без кусочков мяса во флакон вместимостью 20-30 мл, центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 20 мин. Пипеткой осторожно удаляют надосадочную жидкость, а к полученной биомассе добавляют небольшое количество стерильного раствора для разведения культуры - ("разводящая" жидкость) <*>. Осторожно перемешивают и переносят в стандартную пробирку (из набора ОСО 42-28-85 П). Готовят взвесь культуры, соответствующую 10 единицам по стандартному образцу мутности ОСО 42-28-85 П, с использованием разводящей жидкости. По 1 мл взвеси, не перемешивая, высевают на казеин в 10-15 пробирок с 10 мл предварительно регенерированной среды для получения споровой культуры ("споровая" среда). Для определения чистоты культуры при всех пересевах рекомендуется производить высев на агар Хоттингера.

--------------------------------

<*> Состав раствора для разведения культуры ("разводящая" жидкость):

натрия хлорид 8,5 г

кислота тиогликолевая 0,3 мл

вода дистиллированная 1 л

pH 7,2 +/- 0,2.

Раствор стерилизуют при 121 град. C 15 мин. Использовать раствор можно в течение 7 дней со дня приготовления. При хранении раствора более суток перед посевом его необходимо регенерировать выдерживанием флаконов в кипящей водяной бане 15 мин. и последующим быстрым охлаждением в воде.

Пробирки с посевами инкубируют в течение 44-48 ч при температуре (37 +/- 1) град. C. Содержимое пробирок осторожно перемешивают стерильной пипеткой, делают мазки полученной культуры (окрашивание 1%-м раствором генцианвиолета), микроскопируют и определяют количество спор (М) в процентах по формуле:

М = - x 100%,

где:

n - число спор в 3-5 полях зрения;

N - общее число (не менее 100) клеток (палочек и спор) в 3-5 полях зрения.

Для хранения отбирают пробирки, содержащие не менее 5% спор <*>. Пробирки накрывают полиэтиленовой пленкой и хранят при температуре от 2 до 8 град. C не более 6 месяцев в условиях, предохраняющих культуру от высыхания. Используют по мере необходимости.

--------------------------------

<*> Для получения большего количества пробирок с культурой, закладываемых на хранение, полученную споровую культуру следует вновь пересеять на среду Тароцци (5-6 пробирок), инкубировать в течение 48 ч при температуре (37 +/- 1 ) град. C и затем на "споровую" среду, как описано выше.

Из одной ампулы лиофилизированной культуры допускается не более трех последовательных пересевов на споровую среду хранения с промежуточными пассажами на среде Тароцци.

7.3. Определение показателя стабильности основных

биологических свойств микроорганизмов

Показатель стабильности основных биологических свойств микроорганизмов - отношение числа атипичных по морфологии, биохимическим, серологическим, фаголизабельным и другим свойствам колоний к общему числу колоний на чашках (%). Определение этого показателя проводят на чашках, где выросло не менее 25 и не более 150 колоний. Изучают свойства культур, выращенных на питательных средах, по культурально-морфологическим, биохимическим, серологическим, фаголизабельным и другим признакам. При этом оцениваются:

а) характер роста культур (равномерное помутнение среды, формирование пленки на поверхности среды, придонно-пристеночный рост, рост в виде осадка и другое в жидких средах). Равномерное, зональное помутнение среды, рост по уколу, сталактитовый рост, в виде елочки и другое - в полужидких средах; форма, структура, характер роста колоний, диаметр - на плотных средах;

б) морфология микроорганизмов - форма (кокки, палочки, отсутствие полиморфизма в размерах, окраске и др.), расположение (одиночное, парное, гроздевидное, цепочки и др.), строение (наличие капсулы, жгутиков, спор, включений и др.), подвижность;

в) серологические свойства изучают в реакции агглютинации на стекле с типовыми агглютинирующими сыворотками. Проверяют физико-химическое состояние клеток - стабильность взвеси микробов (отсутствие спонтанной агглютинации) в пробе с кипячением 1 млрд. микробных клеток в 0,9%-й NaCl;

г) биохимические свойства (ферментация углеводов, образование H2S, индола, токсинообразование, гемолиз и др.), пигментообразование;

д) фаголизабельность.

Данные свойства определяют по общепринятым методикам. По п.п. "в", "г", "д" изучают не менее чем 3 колонии с каждой чашки.

7.4. Определение показателей чувствительности

среды и скорости роста микроорганизмов

Чувствительность среды - максимальное разведение культуры, обеспечивающее визуально обнаруживаемый рост <*> колоний искомого штамма в течение определенного времени и температуры на всех засеянных чашках (пробирках) с питательной средой.

--------------------------------

<*> О наличии роста микроорганизма судят как по формированию видимых колоний, так и по изменениям самой среды (помутнение, газообразование, появление осадка, пленки, изменение цвета).

По 0,1 мл микробной суспензии из каждого разведения (см. раздел "Приготовление рабочей культуры и посев") высевают на 3 подсушенные чашки Петри (или пробирки) с плотной средой или в 3 пробирки с 10 мл жидкой (полужидкой) питательной среды <*>.

--------------------------------

<*> При посеве в жидкие (полужидкие) питательные среды обогащения посевная доза может составлять 0,5 или 1,0 мл микробной взвеси в каждую пробирку с 9,5 или 9,0 мл среды соответственно.

Посевы помещают в соответствующие условия.

После инкубации производят учет результатов.

Учет результатов:

для плотных сред - через 12-24-48 ч инкубации;

для жидких (среды обогащения) и транспортных (до посева на среду выращивания) - через 3-6 ч и далее.

В случае отсутствия визуально обнаруживаемого роста (для подтверждения его наличия) в жидких средах обогащения после соответствующей инкубации посевов, из каждой пробирки производят высев на чашки с питательным агаром, разделенным на 4-8 секторов, на каждый из которых засевают по одной петле культуры из каждой пробирки со средой.

Скорость роста (ч) определяют по минимальному времени инкубации посевов, за которое при соответствующем разведении обеспечивается отчетливый (не менее 100 жизнеспособных клеток) видимый невооруженным глазом рост культуры (помутнение, наличие пленки, осадка, роста по уклону и др.) во всех засеянных пробирках с жидкими (полужидкими) питательными средами или формирование типичных, легко дифференцируемых колоний на чашках (пробирках) с плотной средой.

7.5. Определение дифференцирующих свойств среды

Дифференцирующие свойства среды - выраженность отличительных признаков патогенных микроорганизмов от непатогенных видов и естественных ассоциантов (по структурным особенностям колоний, их окраске, изменению цвета и другим признакам).

Дифференцирующие свойства сред для выделения микроорганизмов определяют по следующим тестам:

а) выраженность дифференцирующего признака - структура колоний, цвет колоний, изменение цвета среды под колониями, ореол вокруг них, диаметр последнего, появление диффузного изменения цвета среды;

б) четкость дифференциации колоний группы патогенных микроорганизмов от непатогенных, входящих в тот же систематический таксон, и от естественных ассоциантов при посеве смесей.

Ход определения

Для оценки дифференцирующих свойств среды готовят смесь из штамма возбудителя и непатогенного штамма (или ассоцианта). Испытывают два варианта смесей патогенного и непатогенного штаммов в количественном соотношении микробных клеток 1:1 (для учета четкости дифференциации) и 1:10 (для оценки возможности выделения единичных патогенных возбудителей из смеси с другими микроорганизмами) (рекомендуемые разведения см. Прилож. 2). Высев из каждой смеси производят по 0,1 мл на 3 чашки с опытной средой.

Дифференцирующие свойства сред для идентификации чистых культур определяют качественно, используя набор штаммов с положительными и отрицательными признаками по соответствующим тестам.

Ход определения

Посев производят по одной бактериологической петле (d = 2 мм) культуры каждого тест-штамма или взвеси каждого тест-штамма, соответствующей 10 ед. мутности ОСО, в 3 пробирки с питательной средой.

Посев в пробирки с плотной средой осуществляют уколом в столбик и штрихом по скошенной части.

7.6. Определение ингибирующих свойств среды

Ингибирующие свойства среды - степень подавляющего воздействия на рост и (или) проявление типичных свойств сопутствующей микрофлоры.

Показатель ингибирующих свойств выражают как:

- минимальное разведение культуры, при посеве из которого полностью отсутствует рост и (или) проявление типичных свойств посторонней микрофлоры на испытуемой среде при его наличии на среде выращивания (ингибирующие свойства);

- величину отношения среднего числа сформировавшихся колоний тест-штамма на "неингибиторной" среде (среда выращивания) к среднему числу колоний на испытуемой "ингибиторной" среде (показатель ингибиции) с учетом разведения.

Ход определения

Ингибирующее действие плотных сред в отношении микробов-ассоциантов определяют путем посева по 0,1 мл микробной взвеси из соответствующего разведения <*> культуры на 3 чашки с испытуемой средой и на 3 чашки со средой выращивания используемого штамма.

--------------------------------

<*> Выбор разведения культуры зависит от штамма и степени ингибиции конкретной среды.

Ингибирующее действие жидких (полужидких) селективных (элективных) питательных сред определяют, используя монокультуры и смеси. Оценку действия таких сред проводят в сравнении с "нулевым" посевом, т.е. посевом из контролируемой среды без соответствующей инкубации на среду выращивания.

1. После добавления в 2-3 пробирки с испытуемой питательной средой по 0,1 мл <*> микробной взвеси из определенного разведения культуры микроба-ассоцианта и последующего перемешивания суспензии осуществляют посев по 0,1 мл взвеси из каждой пробирки на 3 чашки с плотной питательной средой, оптимальной для используемого штамма ("нулевой посев").

--------------------------------

<*> При посеве в жидкие (полужидкие) питательные среды посевная доза может составлять 0,5 или 1,0 мл микробной взвеси в каждую пробирку с 9,5 или 9,0 мл среды соответственно.

2. Посевы (и в чашках, и в пробирках) инкубируют при соответствующих условиях в зависимости от назначения среды, после чего содержимое каждой из 3-х засеянных пробирок с жидкой (полужидкой) средой перемешивают и повторно высевают по 0,1 мл на 3 чашки с плотной питательной средой. Посевы инкубируют в тех же условиях.

Показатель ингибиции для жидких (полужидких) селективных сред выражают отношением среднего числа колоний, образовавшихся на плотной среде при "нулевом посеве", к среднему числу колоний на той же среде после инкубирования посевного материала в жидкой (полужидкой) питательной среде.

7.7. Определение эффективности среды

Эффективность среды - выход микробных клеток с 1 мл питательной среды (в млрд./мл) и прирост числа микроорганизмов относительно засеянного (показатель эффективности).

Оценку качества накопительных питательных сред по показателю эффективности производят путем определения концентрации микробных клеток в среде после соответствующей инкубации.

Для плотной питательной среды эффективность определяют по следующей

методике: 18-20-часовую культуру смывают с плотной среды 0,9%-м раствором

натрия хлорида и взвесь доводят до 10 единиц по оптическому стандарту

мутности ОСО 42-28-85 П соответствующего года выпуска. Полученную взвесь

разводят 0,9%-м раствором натрия хлорида в 2 раза, что соответствует

приблизительно 500 млн. микробных клеток в 1 мл, и высевают по 0,1 мл (50

млн. м.к.) на 2 пробирки с испытуемой средой, скошенной таким образом,

чтобы в нижней части пробирки не было столбика. Через 20 ч инкубации при 37

град. C культуру полностью смывают с поверхности среды 2,5 мл 0,9%-го

раствора хлорида натрия, переносят в стандартную пробирку (из набора ОСО) и

добавляют такой объем 0,9%-го раствора натрия хлорида, чтобы полученная

суспензия соответствовала 10 единицам по стандартному образцу мутности (10

м.к./мл). Учитывая разведение, определяют выход микробных клеток (млрд.) с

1 мл среды.

Пример:

Смывают культуру с 5 мл питательного агара 2,5 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия, т.е. на 1 мл питательного агара приходится 0,5 мл взвеси культуры. Для разведения 0,5 мл взвеси культуры до содержания 1 млрд. микробных тел (10 ед. по стандарту мутности) пошло 3,5 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия. Следовательно, в пробирке будет содержаться 3,5 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия плюс 0,5 взвеси культуры, т.е. всего 4,0 мл микробной взвеси с концентрацией 1 млрд. м.к./мл, степень разведения составляет 8 (4,0/0,5), а выход микробных клеток с 1 мл среды составит соответственно 8 млрд. Показатель эффективности составит 800 (5 x 8 млрд./50 млн.).

В жидких (полужидких) средах обогащения определение эффекта накопления

проводят по методике, описанной для определения показателя ингибиции. Из

-4 -5 -6 -7

соответствующего разведения культуры (10 , 10 , 10 , 10 ) <*> по 1 мл

взвеси вносят в 3 пробирки с 9 мл жидкой (полужидкой) испытуемой

накопительной средой.

--------------------------------

<*> Выбор разведения для конкретного штамма определяется возможностью подсчета колоний до и после накопления культуры в среде.

Содержимое пробирок перемешивают и из каждой пробирки производят высев по 0,1 мл взвеси культуры на 3 чашки с питательной средой, оптимальной для данного микроорганизма ("нулевой посев").

После соответствующей инкубации посевов в накопительной среде (3-6 ч и более), независимо от видимых изменений, из каждой пробирки после перемешивания производят аналогичный высев на чашки с плотной питательной средой (по 0,1 мл на чашку). В случае обильного роста культуры в жидкой среде, ее перед посевом на чашки необходимо развести. Степень разведения учитывают при обработке результатов.

Через 18-20 и более часов инкубации производят подсчет сформировавшихся колоний на чашках, засеянных из исходных взвесей культур ("нулевой" посев) и после обогащения в жидкой (полужидкой) среде в течение определенного времени.

Прирост числа микроорганизмов в накопительной среде в процессе инкубации посевов в течение соответствующего времени (t) определяют по формуле (%):

n x К

Э = ------,

где:

Э - показатель эффективности (прирост);

n - среднее число колоний на чашках после инкубации культуры в жидкой

(полужидкой) накопительной среде;

n - среднее число колоний при "нулевом посеве";

К - степень разведения.

7.8. Определение показателя прорастания микроорганизмов

Данный показатель определяют для плотных питательных сред.

Подготовку тест-штаммов для контроля, их посев в среду осуществляют по аналогии с методикой определения показателей чувствительности и скорости роста. Посев осуществляют параллельно на испытуемую и контрольную среду <*>, как правило из 2-х разведений, обеспечивающих формирование на чашке Петри не менее 25 и не более 150 колоний.

--------------------------------

<*> В качестве контрольной может быть использована среда, на которой формируется максимальное число колоний из числа засеянных, а также ранее отконтролированная по всем показателям среда с требуемыми свойствами.

Показатель прорастания микробных клеток определяют как отношение среднего числа колоний, образовавшихся на испытуемой среде, к среднему числу колоний на контрольной среде, выраженное в процентах.

7.9. Определение нейтрализующих свойств среды

Нейтрализующие свойства среды - способность среды нейтрализовать действие консервантов, т.е. обеспечивать 100%-е прорастание засеянной культуры.

Данный показатель определяют для сред, используемых при контроле стерильности МИБП. Питательная среда должна нейтрализовать действие консерванта, и ее чувствительность по отношению к тест-штаммам не должна зависеть от его присутствия. К таким средам, в частности, относится тиогликолевая среда, нейтрализующая действие ртутного консерванта - мертиолята.

Ход определения

Для определения нейтрализующих свойств в пробирки с 10,0 мл

тиогликолевой среды вносят раствор мертиолята в максимально используемой

-5

концентрации - 0,5 x 10 г/мл среды, а затем микробную взвесь тест-штамма

A. faecalis 415 из разведений (показательных для чувствительности сред)

-6 -7 -8

10 , 10 , 10 (см. "Определение чувствительности и скорости роста").

Среда считается пригодной в случае визуального обнаружения роста

культуры не менее чем в 2 из 3 засеянных пробирок при посеве тест-штамма из

-7 -8

разведения 10 или не менее чем в одной пробирке из разведения 10 , не

позднее 5 суток инкубации при температуре 34-35 град. C.

7.10. Определение показателя чувствительности

микроорганизмов к антимикробным препаратам

диск-диффузионным методом

Показатель чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам - способность среды обеспечивать рост микроорганизмов в виде газона с образованием четких зон угнетения роста вокруг дисков с соответствующими препаратами.

Данный показатель определяют для сред специального назначения, используемых для выявления чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (АМП), нанесенным на диски. Их наименование и концентрация определяется для конкретной среды.

Ход определения

Для получения газонного роста на чашки высевают по 2 мл микробной

-1

взвеси каждого тест-штамма из разведения 10 , посевной материал

распределяют обкатыванием (избыток удаляют с помощью пастеровской пипетки),

подсушивают 15 мин. на воздухе в условиях асептики, а затем стерильным

пинцетом раскладывают диски с антимикробными лекарственными средствами (ТУ

9398-001-39484474-2000), слегка прижимая их к агару. Инкубируют посевы с

дисками 18-20 ч при температуре (37 +/- 1) град. C.

При измерении зон задержки роста учитывают диаметр только зоны

просветления.

2+ 2+

Контроль содержания двухвалентных катионов (Ca , Mg )

Поскольку действие АМП зависит от скорости их диффузии в агаровую

среду, а также антагонистического воздействия на них компонентов

питательной среды, в частности, тимина и тимидина (ингибиторы

2+ 2+

сульфаниламидов и триметоприма) и катионов Ca и Mg (ингибиторы

аминогликозидов, фторхинололов, карбапенемов, тетрациклинов и др.), то

среды необходимо стандартизовать по этим показателям.

2+ 2+

О содержании в среде двухвалентных катионов (Ca , Mg ) косвенно можно

судить по результатам тестирования чувствительности синегнойной палочки к

аминогликозидам, определяя чувствительность тест-штамма P. aeruginosa АТСС

27853 (диаметр зоны подавления роста вокруг диска с гентамицином должен

составлять от 16 до 21 мм, минимальная подавляющая концентрация (МПК) - в

пределах 0,5-2,0 мкг/мл).

Контроль содержания тимина и тимидина

О пригодности среды для определения чувствительности микроорганизма к сульфаниламидам и триметаприму (антифолатам) можно косвенно судить по результатам тестирования контрольного штамма E. faecalis АТСС 29212. Среда считается удовлетворительной по качеству при МПК триметоприм/сульфометоксазола в отношении данного штамма < 0,5/9,5 мг/мл и диаметре зоны подавления роста вокруг диска с этим препаратом >= 20 мм.

7.11. Определение показателей сохранения

жизнеспособности и стабильности основных биологических

свойств микроорганизмов в транспортных средах

Сохранение жизнеспособности и стабильности основных биологических свойств микроорганизмов - основные требования для транспортных (консервирующих) сред, в течение определенного времени задерживающих размножение и рост микроорганизмов (см. также раздел "Определение показателя стабильности биологических свойств микроорганизмов").

Ход определения

По 1 мл микробной взвеси тест-штаммов соответствующих видов из

-5 -6

разведений (обычно 10 и 10 ) высевают на 4 пробирки с транспортной

средой. Из 2 пробирок сразу после посева, тщательно перемешав содержимое,

производят высев по 0,1 мл взвеси на чашки Петри со средой выращивания

("нулевой" посев). Посевы на чашках инкубируют в условиях, необходимых для

роста тест-штаммов. Посевы в пробирках выдерживают при температуре 18-24

град. C в течение 24 ч, а затем из них производят высев, который инкубируют

при тех же условиях, что и "нулевой" посев.

Среднее количество колоний, выросших на среде выращивания при "нулевом" посеве и после 24 ч выдерживания в транспортной среде, не должно различаться более чем в 10 раз.

Приложение N 1

ПЕРЕЧЕНЬ

ПОКАЗАТЕЛЕЙ, НЕОБХОДИМЫХ ДЛЯ КОНТРОЛЯ ОСНОВНЫХ ГРУПП

ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД <*>

--------------------------------

<*> Определяющим показателем при оценке качества питательной среды является соответствие по специфической активности.

Показатели	Тип среды
	неселективные среды					селективные среды
	основы и до- бавки	среды для пред- вари- тельной иденти- фикации	среды для куль- тивиро- вания	накопи- тельные среды	транс- порт- ные среды	среды для иденти- фикации	среды для вы- деления и диф- ферен- циации	накопи- тельные среды
1	2	3	4	5	6	7	8	9
Внешний вид препарата	+	+	+	+	+	+	+	+
Растворимость	Для сухих препаратов
Прозрачность и цветность	+	+	+	+	+	+	+	+
pH	+	+	+	+	+	+	+	+
Белок	+	-	-	-	-	-	-	-
Пептиды по биуретовой реакции	+	-	-	-	-	-	-	-
Общий азот с реактивом Несслера	+	-	-	-	-	-	-	-
Аминный азот	+	+	+	+	+	+	+	+
Хлориды	+	+	+	+	+	+	+	+
Потери в массе при высушивании	Для сухих препаратов
Сухой остаток	+ <*>
Стерильность	Для готовых к применению препаратов
Прочность студня	-	для агаровых сред		-	-	для агаровых сред		-
Температуры плавления студня среды	-	Для готовых к применению агаровых сред		-	-	Для готовых к применению агаровых сред		-
Продолжитель- ность плавле- ния студня среды	-	Для готовых к применению агаровых сред		-	-	Для готовых к применению агаровых сред		-
Срок годности	+	+	+	+	+	+	+	+
Контроль чис- тоты розлива	+	+	+	+	+	+	+	+
Чувствитель- ность среды	+	+	+	+	+	+	+	+
Дифференциру- ющие свойства среды	-	+	-	-	-	+	+	-
Ингибирующие свойства сре- ды (показа- тель ингиби- ции)	-	-	-	-	-	+	+	+
Эффективность среды (пока- затель эффек- тивности)	-	-	-	+	-	-	-	+
Показатель прорастания	Для препаратов, содержащих агар
Показатель стабильности основных биологических свойств мик- роорганизмов	+	+	+	+	+	+	+	+
Нейтрализую- щие свойства среды	Для сред, используемых при контроле стерильности МИБП
Чувствитель- ность микро- организмов к АМП	Для сред, используемых для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам
Показатели жизнеспособ- ности и сохранения основных био- логических свойств мик- роорганизмов в транспорт- ных средах	-	-	-	-	+	-	-	-
<*> Для готовых к применению препаратов.

Приложение N 2

ТРЕБОВАНИЯ К СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЗАРЕГИСТРИРОВАННЫХ

В РФ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ДОБАВОК

┌────────────┬─────┬───────────┬─────────────┬───────────────┬───────────┬──────────┬────────────────────────────────────────┐

│ Среды и │ Тип │Назначение │Специфическая│ Тест-штаммы │Разведение │Инкубация │ Результаты роста │

│ добавки │ <1> │ │ активность │ (коллекция) │ │ │ │

├────────────┼─────┼───────────┼─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │

├────────────┴─────┴───────────┴─────────────┴───────────────┴───────────┴──────────┴────────────────────────────────────────┤

│ Неселективные среды для культивирования микроорганизмов │

├────────────┬─────┬───────────┬─────────────┬───────────────┬───────────┬──────────┬────────────────────────────────────────┤

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательный │ЖИД- │Для │Чувствитель- │C. xerosis 1911│10 │44-48 ч │Рост С. xerosis, S. aureus, E. coli, │

│бульон для │КАЯ │культиви- │ность среды и│S. aureus │ │(37 +/- 1)│P. aeruginosa в виде диффузного │

│культивиро- │ │рования │стабильность │Wood-46 <2> │ │град. C │помутнения, S. pyogenes в виде придонно-│

│вания мик- │ │различных │основных био-├───────────────┼───────────┤ │пристеночного роста (возможно слабое │

│роорганизмов│ │микроорга- │логических │ │ -4 │ │диффузное помутнение) │

│(сухие: СПБ,│ │низмов │свойств мик- │S. pyogenes │10 │ │ │

│ГРМ-бульон, │ │ │роорганизмов │Dick I │ │ │ │

│ГМФ-бульон; │ │ │ ├───────────────┼───────────┼──────────┤ │

│готовые к │ │ │ │ │ -7 │ │ │

│употребле- │ │ │ │E. coli │10 │20-24 ч │ │

│нию: бульон │ │ │ │(О55:К59) │ │(37 +/- 1)│ │

│Хоттингера, │ │ │ │3912/41 <2> │ │град. C │ │

│мясо- │ │ │ │P. aeruginosa │ │ │ │

│пептонный │ │ │ │27/99 <2> │ │ │ │

│бульон) │ │ ├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│ │ │ │Стабильность │S. flexneri │1 бак. │ │Образование индола (S. flexneri) и │

│ │ │ │основных │la 8516 <3> │петля │ │сероводорода (S. typhi), определяемое по│

│ │ │ │биологических│S. typhi H-901 │ │ │индикатору │

│ │ │ │свойств мик- │ГДР/ГИСК │ │ │ │

│ │ │ │роорганизмов │<4> │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательный │ПЛОТ-│Для │Чувствитель- │S. flexneri la │10 │18-20 ч │Рост в виде изолированных колоний, │

│агар для │НАЯ │культиви- │ность среды и│8516 │ │(37 +/- 1)│бесцветных, прозрачных │

│культивиро- │ │рования │стабильность │S. sonnei │ │град. C │ │

│вания микро-│ │различных │основных био-│"S-form" │ │ │ │

│организмов, │ │микро- │логических │ │ │ │ │

│сухой (СПА, │ │организмов │свойств мик- │ │ │ │ │

│ГРМ-агар, │ │ │роорганизмов │ │ │ │ │

│ГМФ-агар; │ │ ├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│готовые к │ │ │ │ │ 1 │ │ │

│употребле- │ │ │Стабильность │P. aeruginosa │10 │18-20 ч │Образование сине-зеленого или зеленого │

│нию: агар │ │ │основных │27/99 │ │(37 +/- 1)│пигмента P. aeruginosa 27/99 и оранжево-│

│Хоттингера, │ │ │биологических│S. marcescens │ │град. C │красного S. marcescens 1 │

│мясо- │ │ │свойств мик- │303 │ │S. marces │ │

│пептонный │ │ │роорганизмов │(или S. │ │cens 1 при│ │

│агар) │ │ │ │plymuthica 1) │ │(22 +/- 2)│ │

│ │ │ │ │ │ │град. C │ │

│ <1> Тип (консистенция) питательной среды, подготовленной к применению; │

│ <2> Тест-штамм для контроля ГРМ-бульона; │

│ <3> Тест-штамм не обязателен для контроля мясо-пептонного бульона; │

│ <4> Тест-штамм не обязателен для контроля мясо-пептонного бульона и бульона Хоттингера. │

├────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┤

│ Дифференциально-диагностические селективные среды для выделения микроорганизмов │

│ │ │ │ │ │ -7 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для выделе-│Чувствитель- │S. aureus │10 │18-22 ч │Рост в виде единичных колоний. Колонии │

│среда для │НАЯ │ния и диф- │ность среды и│"Виотко" │ │(37 +/- 1)│S. aureus - круглые, оранжевые с черным │

│выделения и │ │ференциации│стабильность │P. aeruginosa │ │град. C │центром или без него, E. coli - серые │

│дифференциа-│ │возбудите- │основных био-│89 │ │ │или серо-голубые, P. aeruginosa - │

│ции возбуди-│ │лей аэроб- │логических │E. coli 3912/41│ │ │розового цвета │

│телей │ │ной инфек- │свойств мик- │(О55:К59) │ │ │ │

│аэробной │ │ции/стафи- │роорганизмов │P. mirabilis │ │ │ │

│инфекции, │ │лококка, │ │3177 │ │ │ │

│сухая │ │синегнойной├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ │ │палочки, │ │ │ -5 │ │ │

│ │ │кишечной │Дифференциру-│Смеси (1:1): │из 10 │ │Четкая дифференциация: S. aureus - в │

│ │ │палочки/ │ющие свойства│1. S. aureus + │разбавлен- │ │виде оранжевых колоний с черным центром │

│ │ │из раневого│ │E. coli │ное в 5 раз│ │или без него; E. coli в виде серых или │

│ │ │содержимого│ │2. P. │(условно │ │серо-голубых колоний; P. aeruginosa в │

│ │ │ │ │aeruginosa + │ -6 │ │виде колоний розового цвета │

│ │ │ │ │E. coli │10 ) │ │ │

│ │ │ │ │3. P. │ │ │ │

│ │ │ │ │aeruginosa + │ │ │ │

│ │ │ │ │S. aureus │ │ │ │

│ │ │ ├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │P. mirabilis │10 │ │На среде подавляется "роение" P. │

│ │ │ │свойства │3177 │ │ │mirabilis, колонии в О-форме, прозрачные│

│ │ │ │ │ │ │ │красноватого цвета, на питательном агаре│

│ │ │ │ │ │ │ │"роение" наблюдается │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ЖИД- │Для выделе-│Чувствитель- │E. coli Ewing │10 │44-48 ч │Рост в виде диффузного помутнения среды │

│среда для │КАЯ │ния и диф- │ность среды и│(О124:К72) │ │(37 +/- 1)│с изменением цвета с зеленого на желтый │

│выделения и │ │ференциации│стабильность │227; │ │град. C │ │

│дифференциа-│ │энтеробак- │основных био-│K. pneumoniae │ │ │ │

│ции энте- │ │терий по │логических │3534/51; │ │ │ │

│робактерий, │ │признаку │свойств мик- │C. fieundii │ │ │ │

│сухая (среда│ │ферментации│роорганизмов │101/57; │ │ │ │

│Кода, │ │лактозы при│ │S. marcescens │ │ │ │

│SDS-бульон) │ │санитарном │ │1; │ │ │ │

│ │ │обследова- │ │S. flexneri │ │ │ │

│ │ │нии пищевых│ │la 8516 │ │ │ │

│ │ │продуктов ├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ │ │(среда │ │ │ -6 │ │ │

│ │ │Кода), объ-│Дифференциру-│E. coli 675; │10 │20-24 ч │Диффузное помутнение среды без изменения│

│ │ │ектов внеш-│ющие свойства│E. aerogenes │ │(37 +/- 1)│цвета │

│ │ │ней среды │ │10006 │ │град. C │ │

│ │ │/вода, смы-├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ │ │вы и др./ │ │ │ -1 │ │ │

│ │ │(SDS- │Ингибирующие │P. vulgaris │10 │44-48 ч │На среде подавляется рост стафилококка и│

│ │ │бульон) │свойства │HX 19222 │ │(37 +/- 1)│протея. Среда остается прозрачной без │

│ │ │ │ │S. aureus │ │град. C │изменения цвета, в питательном бульоне │

│ │ │ │ │Wood-46 │ │ │наблюдается диффузное помутнение │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ЖИД- │Для обнару-│Чувствитель- │E. coli 675; │10 │22-24 ч │Рост E. coli, K. pneumoniae, C. freundii│

│среда для │КАЯ │жения бак- │ность среды и│K. pneumoniae │ │(37 +/- 1)│в виде диффузного помутнения среды и │

│обнаружения │ │терий груп-│стабильность │418; │ │град. C │газообразования; E. aerogenes - в виде │

│бактерий │ │пы кишечной│основных │C. freundii │ │ │диффузного помутнения среды и слабого │

│группы │ │палочки по │биологических│101/57; │ │E. coli │газообразования; P. aeruginosa - в виде │

│кишечной │ │признаку │свойств мик- │E. aerogenes │ │675 при │слабого помутнения среды без │

│палочки, │ │ферментации│роорганизмов │10006; │ │(43 +/- 1)│газообразования │

│сухая (среда│ │лактозы при│ │P. aeruginosa │ │град. C │ │

│Кесслера- │ │санитарно- │ │27/99 │ │ │ │

│ГРМ) │ │бактериоло-├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ │ │гическом │ │ │ -4 │ │ │

│ │ │обследова- │Ингибирующие │P. vulgaris │10 │44-48 ч │На среде подавляется рост стафилококка и│

│ │ │нии пищевых│свойства │HX19222 │ │(37 +/- 1)│протея. Среда остается прозрачной, в │

│ │ │продуктов и│ ├───────────────┼───────────┤град. C │питательном бульоне наблюдается │

│ │ │объектов │ │ │ -1 │ │диффузное помутнение │

│ │ │внешней │ │S. aureus │10 │ │ │

│ │ │среды │ │Wood-46 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Выделение │Чувствитель- │S. sonnei │10 раз- │18-20 ч │Рост в виде изолированных колоний. │

│среда для │НАЯ │энтеробак- │ность среды и│"S-form"; │бавленное │(37 +/- 1)│Колонии S. dysenteriae I прозрачные, │

│выделения │ │терий из │стабильность │S. dysenteriae │1:1 (услов-│град. C │бесцветные, S. sonnei бесцветные или │

│энтеробакте-│ │исследуемо-│основных │I 1362; │ -7 │ │могут быть слегка розовыми, со слабо │

│рий, сухая │ │го матери- │биологических│E. coli 3912/41│но 10 │ │выраженным центром E. coli 3912/41 - │

│(агар Эндо) │ │ала и их │свойств мик- │(О55:К59); │ │ │красные с металлическим блеском, E. coli│

│ │ │дифферен- │роорганизмов │E. coli 168/59;│ │ │168/59 - металлический блеск может быть │

│ │ │циация по │ │(О111:К58) │ │ │менее выраженный │

│ │ │признаку ├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ │ │ферментации│ │ │ -6 │ │ │

│ │ │лактозы │Дифференциру-│Смеси (1:1): │10 │ │Лактозоотрицательные энтеробактерии │

│ │ │(лактозоот-│ющие свойства│1. S. sonnei │ │ │образуют прозрачные или полупрозрачные │

│ │ │рицательные│ │"S-form" и E. │ │ │бесцветные колонии (могут образовывать │

│ │ │шигеллы от │ │coli 168/59 │ │ │колонии бледно-розового цвета). │

│ │ │лактозопо- │ │(О111:К58); │ │ │Лактозоположительные энтеробактерии │

│ │ │ложительных│ │2. S. │ │ │образуют колонии красного цвета с │

│ │ │эшерихий) │ │dysenteriae I │ │ │металлическим блеском или без него │

│ │ │ │ │1362 и E. coli │ │ │ │

│ │ │ │ │3912/41 │ │ │ │

│ │ │ │ │(О55:К59) │ │ │ │

│ │ ├───────────┼─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ │ │ │ │ │ -1 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │S. aureus │10 │ │На среде подавляется рост стафилококка, │

│ │ │ │свойства │Wood-46 │ │ │на питательном агаре наблюдается │

│ │ │ │ │ │ │ │газонный рост │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Выделение │Чувствитель- │E. coli 3912/41│10 │18-20 ч │Рост в виде изолированных колоний. │

│среда для │НАЯ │энтеробак- │ность среды и│(О55:К59); │ │(37 +/- 1)│Колонии E. coli ярко-розовые, S. │

│выделения и │ │терий из │стабильность │S. typhimurium │ │град. C │flexneri - полупрозрачные, бесцветные, │

│дифференциа-│ │исследуемо-│основных │79; │ │ │S. typhimurium - полупрозрачные, │

│ции энте- │ │го матери- │биологических│S. flexneri la │ │ │бесцветные. Колонии P. mirabilis F-392 │

│робактерий │ │ала (моча, │свойств мик- │8516 │ │ │изолированные, бесцветные в О-форме │

│селективная │ │фекалии, │роорганизмов │ │ │ │колонии без "роения". На питательном │

│сухая (типа │ │пищевые │ │ │ │ │агаре "роение" наблюдается │

│Макконки │ │продукты, ├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│агара) │ │вода) и их │ │ │ -6 │ │ │

│ │ │дифферен- │Дифференциру-│Смесь (1:1): │10 │ │Лактозоположительные энтеробактерии │

│ │ │циация по │ющие свойства│E. coli 3912/41│ │ │растут в виде ярко-розовых колоний, │

│ │ │признаку │ │(О55:К59) с │ │ │лактозоотрицательные - в виде бесцветных│

│ │ │ферментации│ │S. typhimurium │ │ │ │

│ │ │лактозы │ │79 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -1 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │S. aureus 209-Р│10 │ │На среде подавляется рост стафилококка, │

│ │ │ │свойства │ │ │ │на питательном агаре наблюдается │

│ │ │ │ ├───────────────┼───────────┤ │газонный рост. На среде подавляется │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │"роение" протея, на питательном агаре │

│ │ │ │ │P. mirabilis │10 │ │"роение" наблюдается │

│ │ │ │ │F-392 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -7 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для выделе-│Чувствитель- │P. mirabilis │10 │20-22 ч │Рост в виде единичных колоний │

│среда для │НАЯ │ния бакте- │ность среды │3177; │ │(37 +/- 1)│ │

│выделения │ │рий родов │ │P. alcalifae- │ │град. C │ │

│бактерий │ │Proteus, │ │cins 1035-49 │ │ │ │

│родов │ │Provi- │ ├───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│Proteus, │ │dencia, │ │ │ -6 │ │ │

│Providencia,│ │Morganella │ │P. vulgaris │10 │ │Рост в виде изолированных колоний │

│Morganella, │ │из инфици- │ │HX19; │ │ │ │

│сухая │ │рованного │ │M. morganii │ │ │ │

│ │ │материала │ │1707 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│ │ │ │Стабильность │P. mirabilis │10 │ │Наблюдается формирование колоний в │

│ │ │ │основных │3177; │ │ │О-форме, без "роения" голубоватого │

│ │ │ │биологических│P. alcalifae- │ │ │цвета. Возможна Н-форма колоний P. │

│ │ │ │свойств мик- │cins 1035-49 │ │ │vulgaris и P. Mirabilis с зоной роения │

│ │ │ │роорганизмов ├───────────────┼───────────┤ │не более 5 мм │

│ │ │ │ │ │ -5 │ │ │

│ │ │ │ │P. vulgaris │10 │ │ │

│ │ │ │ │HX19; │ │ │ │

│ │ │ │ │M. morganii │ │ │ │

│ │ │ │ │17074 │ │ │ │

│ │ │ │ │P. rettgeril │ │ │ │

│ │ │ │ │(Титов) │ │ │ │

│ │ │ ├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ │ │ │ │ │ -1 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │E. coli 3912/41│10 │44-48 ч │На среде подавляется рост кишечной │

│ │ │ │свойства │(О55:К59); │ │(37 +/- 1)│палочки, стафилококка, синегнойной │

│ │ │ │ │S. aureus │ │град. C │палочки, на питательном агаре │

│ │ │ │ │209-Р; │ │ │наблюдается газонный рост этих │

│ │ │ │ │P. aeruginosa │ │ │микроорганизмов │

│ │ │ │ │08 Habs │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для выделе-│Чувствитель- │S. typhi H-901 │10 раз- │18-20 ч │Рост в виде изолированных колоний. │

│среда для │НАЯ │ния сальмо-│ность среды и│ГДР/ГИСК; │бавленное │(37 +/- 1)│Колонии S. typhi, S. paratyphi, S. │

│выделения │ │нелл и ши- │стабильность │S. paratyphi А │1:1 (услов-│град. C │flexneri - бесцветные; S. sonnei - │

│сальмонелл и│ │гелл из ис-│основных │225; │ -7 │ │бесцветные или слегка розовые, E. coli -│

│шигелл, │ │следуемого │биологических│S. flexneri la │но 10 ) │ │красные │

│сухая (SS- │ │материала │свойств мик- │8516; │ │ │ │

│агар, бакто-│ │(фекалии, │роорганизмов │S. sonnei │ │ │ │

│агар Плоски-│ │моча и др.)│ │"S-form" │ │ │ │

│рева) │ │и их диффе-├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ │ │ренциация │Дифференциру-│Смеси (1:1): │шигеллы и │ │Хорошая дифференциация: колонии │

│ │ │от других │ющие свойства│1. S. typhi │сальмонеллы│ │сальмонелл - бесцветные; шигелл - │

│ │ │энтеробак- │ │H-901 ГДР/ГИСК │ -6 │ │бесцветные или слегка розовые, эшерихий │

│ │ │терий по │ │и E. coli │10 ; │ │- красные │

│ │ │признаку │ │3912/41 │E. coli │ │ │

│ │ │ферментации│ │(О55:К59); │3912/41 │ │ │

│ │ │лактозы │ │2. S. paratyphi│(О55:К59) │ │ │

│ │ │ │ │A 225 и E. coli│ -4 │ │ │

│ │ │ │ │(О55:К59); │10 <*>, │ │ │

│ │ │ │ │3. S. flexneri │ -5 │ │ │

│ │ │ │ │la 8516 и E. │10 │ │ │

│ │ │ │ │coli 3912/41 │ │ │ │

│ │ │ │ │(О55:К59); │ │ │ │

│ │ │ │ │4. S. sonnei │ │ │ │

│ │ │ │ │"S-form" и E. │ │ │ │

│ │ │ │ │coli 3912/41 │ │ │ │

│ │ │ │ │(О55:К59) │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -1 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │S. aureus │10 │ │На средах подавляется рост стафилококка,│

│ │ │ │свойства │Wood-46 │ │ │на питательном агаре наблюдается │

│ │ │ │ ├───────────────┼───────────┤ │газонный рост. На средах подавляется │

│ │ │ │ │ │ -5 -6 │ │рост эшерихий не менее чем в три раза │

│ │ │ │ │E. coli │10 , 10 │ │по отношению к числу колоний на │

│ │ │ │ │3912/41 │<**> │ │питательном агаре. На SS-агаре │

│ │ │ │ │(О55:К59) │ │ │подавляется "роение" протея, на │

│ │ │ │ ├───────────────┼───────────┤ │бактоагаре Плоскирева и питательном │

│ │ │ │ │ │ -5 │ │агаре "роение" наблюдается │

│ │ │ │ │P. mirabilis │10 │ │ │

│ │ │ │ │3177 <*>; │ │ │ │

│ │ │ │ │P. vulgaris │ │ │ │

│ │ │ │ │HX19222 <*> │ │ │ │

│ <*> Тест-штамм не обязателен для контроля бактоагара Плоскирева; │

│ <**> Разведение не обязательно для контроля SS-агара. │

│ │ │ │ │ │ -6│ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Выделение и│Чувствитель- │E. coli 4 │1:1 из 10 │18-20 ч │Рост в виде изолированных колоний. На │

│среда для │НАЯ │идентифика-│ность среды и│(О157:Н7); │(условно │(37 +/- 1)│сорбитол агаре колонии E. coli 4 │

│выделения и │ │ция E. coli│стабильность │E. coli │ -7 │град. C │(О157:Н7) и S. flexneri - бесцветные или│

│дифференци- │ │О157:Н7 и │основных │3912/41 │10 ) │ │светло-розовые, E. coli 3912/41 │

│ации E. coli│ │др. энтеро-│биологических│(О55:К59); │ │ │(О55:К59) - малиновые со слабовыраженным│

│О157:Н7 и │ │бактерий из│свойств мик- │S. typhimurium │ │ │металлическим блеском или без него, S. │

│др. энтеро- │ │исследуемо-│роорганизмов │79; │ │ │typhimurium - малиновые с металлическим │

│бактерий по │ │го материа-│ │S. flexneri la │ │ │блеском. На ЭДКС-агаре колонии E. coli │

│признаку │ │ла (фека- │ │8516 │ │ │4 (О157:Н7) полупрозрачные, бесцветные, │

│ферментации │ │лии, питье-│ │ │ │ │колонии E. coli 3912/41 (О55:К59) │

│сорбита, │ │вая и сточ-│ │ │ │ │желтого цвета, S. flexneri, полу- │

│сухая │ │ные воды, │ │ │ │ │прозрачные, бесцветные, S. typhimurium │

│(сорбитол E.│ │пищевые │ │ │ │ │желтого цвета │

│coli О157:Н7│ │продукты и ├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│агар, ЭДКС- │ │др.) по │ │ │ -6 │ │ │

│агар) │ │признаку │Дифференциру-│Смеси (1:1) │10 │ │На средах сорбитотрицательные энтеробак-│

│ │ │ферментации│ющие свойства│1. E. coli 4 │ │ │терии, в том числе E. coli 4 (О157:Н7) │

│ │ │сорбита │ │(О157:Н7) с │ │ │образуют полупрозрачные, бесцветные или │

│ │ │ │ │E. coli │ │ │светло-розовые колонии. Сорбитположи- │

│ │ │ │ │3912/41 │ │ │тельные колонии на Сорбитол E. coli │

│ │ │ │ │(О55:К59); │ │ │О157:Н7 агаре образуют колонии розовато-│

│ │ │ │ │2. E. coli 4 │ │ │малинового или малинового цвета с │

│ │ │ │ │(О157:Н7) с │ │ │металлическим блеском или без него, на │

│ │ │ │ │S. typhimurium │ │ │ЭДКС-агаре - желтые │

│ │ │ │ │79 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -1 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │S. aureus │10 │ │На средах ингибируется рост стафилокок- │

│ │ │ │свойства │Wood-46 │ │ │ка, на питательном агаре - газонный │

│ │ │ │ ├───────────────┼───────────┤ │рост. На среде ЭДКС-агар подавляется │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │"роение" протея, на среде Сорбитол E. │

│ │ │ │ │P. vulgaris │10 │ │coli О157:Н7 агар и питательном агаре │

│ │ │ │ │HX19222 <*> │ │ │"роение" наблюдается │

├────────────┴─────┴───────────┴─────────────┴───────────────┴───────────┴──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ <*> Тест-штамм не обязателен для контроля Сорбитол E. coli О157:Н7 агара. │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Сальмонеллы│Чувствитель- │S. typhi H-901 │10 раз- │44-48 ч │Рост в виде изолированных колоний. │

│среда для │НАЯ │ │ность среды и│ГДР/ГИСК; │бавленное │(37 +/- 1)│Колонии S. typhi, S. typhimurium, S. │

│выделения │ │ │стабильность │S. typhimurium │1:1 (услов-│град. C │london черные с блестящей зоной вокруг и│

│сальмонелл, │ │ │основных │79; │ -7 │ │черным цветом среды под ними; S. │

│сухая (вис- │ │ │биологических│S. london 3496;│но 10 ) │ │paratyphi - зеленые с темным центром; │

│мут-сульфит │ │ │свойств мик- │S. paratyphi A │ │ │S. galinarum - зеленые; S. typhi │

│агар) │ │ │роорганизмов │225; │ │ │bismuth - полиморфные черные с │

│ │ │ │ │S. gallinarum │ │ │окрашиванием среды под ними в черный │

│ │ │ │ │665; │ │ │цвет │

│ │ │ │ │S. typhi │ │ │ │

│ │ │ │ │bismuth │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 -3 │ │ │

│ │ │ │Дифференциру-│Смеси (1:1) │10 , 10 │ │Рост сальмонелл в виде черных колоний с │

│ │ │ │ющие свойства│S. typhimurium │ -4 │ │блестящей зоной вокруг них и окрашива- │

│ │ │ │ │79 и E. coli │и 10 │ │нием в черный цвет среды под колониями. │

│ │ │ │ │3912/41 │ │ │S. paratyphi и S. gallinarum образуют │

│ │ │ │ │(О55:К59) │ │ │зеленые колонии. Эшерихии растут в виде │

│ │ │ │ │ │ │ │зеленовато-коричневых колоний │

│ │ │ │ │ │ -1 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │S. aureus │10 │ │На среде подавляется рост стафилококков,│

│ │ │ │свойства │Wood-46 │ │ │клебсиелл и "роение" протея. На │

│ │ │ │ ├───────────────┼───────────┤ │питательном агаре наблюдается газонный │

│ │ │ │ │ │ -5 │ │рост стафилококка, густой рост клебсиелл│

│ │ │ │ │K. rhinoscle- │10 │ │и "роение" протея │

│ │ │ │ │romatis NCTC │ │ │ │

│ │ │ │ │5046 │ │ │ │

│ │ │ │ ├───────────────┼───────────┤ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│ │ │ │ │P. vulgaris │10 │ │ │

│ │ │ │ │HX19222 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Среда для │ПЛОТ-│Для выделе-│Чувствитель- │S. paratyphi A │10 │18-20 ч │Рост в виде изолированных колоний. │

│выделения │НАЯ │ния сальмо-│ность среды и│225; │ │(37 +/- 1)│Колонии S. paratyphi A 225 розового │

│сальмонелл- │ │нелл из ис-│стабильность │S. typhimurium │ │град. C │цвета с розовым ореолом, S. typhimurium │

│ПД, сухая │ │следуемого │основных │301; │ │ │301 - розово-красного цвета с розово- │

│(питательная│ │материала │биологических│E. coli ATCC │ │ │красным ореолом, E. coli ATCC 25922 │

│среда с │ │для сани- │свойств мик- │25922 │ │ │желто-зеленые с желто-зеленым ореолом │

│бриллианто- │ │тарно-бак- │роорганизмов │ │ │ │ │

│вым зеленым │ │териологи- ├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│и феноловым │ │ческого │ │ │ -6 │ │ │

│красным) │ │контроля │Дифференциру-│Смесь (1:1) │10 │ │Хорошая дифференциация сальмонелл │

│ │ │пищевых │ющие свойства│S. typhimurium │ │ │(колонии розового или розово-красного │

│ │ │продуктов и│ │301 и E. coli │ │ │цвета) от эшерихий (колонии желто- │

│ │ │лекарствен-│ │АТСС 25922 │ │ │зеленые) │

│ │ │ных средств├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│ │ │ │ │ │ -3 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │S. aureus │10 │ │На среде подавляется рост стафилококка, │

│ │ │ │свойства │209 Р │ │ │на питательном агаре наблюдается густой │

│ │ │ │ │ │ │ │рост │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для выделе-│Чувствитель- │S. epidermidis │10 │48 ч │Рост в виде изолированных и единичных │

│среда для │НАЯ │ния стафи- │ность среды и│АТСС 14990; S. │ │(37 +/-1) │колоний. Колонии S. aureus "Виотко" │

│выделения │ │лококков из│стабильность │saprophyticus │ -6 -7 │град. C │желтого цвета, S. epidermidis и S. │

│стафилокок- │ │исследуемо-│основных │АТСС 15305; │10 , 10 │ │saprophyticus белого цвета │

│ков, сухая │ │го материа-│биологических│S. aureus │ │ │ │

│(солевой │ │ла (пищевые│свойств мик- │"Виотко" │ │ │ │

│агар-М, │ │продукты, │роорганизмов │ │ │ │ │

│элективный │ │грудное мо-├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│солевой │ │локо, смы- │ │ │ -2 │ │ │

│агар) │ │вы, вода, │Ингибирующие │E. coli 168/59 │10 │ │На среде подавляется рост эшерихий, │

│ │ │кровь, кал │свойства │(О111:К58); │ │ │протея, синегнойной палочки, на │

│ │ │и др.) │ │P. aeruginosa │ │ │питательном агаре наблюдается газонный │

│ │ │ │ │273; │ │ │рост этих микроорганизмов │

│ │ │ │ │P. vulgaris │ │ │ │

│ │ │ │ │HX19222 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -7 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для селек- │Чувствитель- │P. aeruginosa │10 │23-25 ч │Рост в виде единичных колоний │

│среда для │НАЯ │тивного │ность среды │08 (Habs); │ │(37 +/- 1)│ │

│выделения │ │выделения │ │P. aeruginosa │ │град. C │ │

│синегнойной │ │культуры │ │26; │ │ │ │

│палочки, │ │Pseudomonas│ │P. aeruginosa │ │ │ │

│сухая (ЦПХ- │ │aeruginosa │ │165 │ │ │ │

│агар) │ │из инфици- ├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│ │ │рованного │ │ │ -6 │ │ │

│ │ │материала │Стабильность │P. aeruginosa │10 │ │Колонии P. aeruginosa полупрозрачные с │

│ │ │(отделяемое│основных │08 (Habs); │ │ │окрашиванием среды в зеленый или сине- │

│ │ │ожоговых и │биологических│P. aeruginosa │ │ │зеленый цвет │

│ │ │хирургичес-│свойств мик- │26; │ │ │ │

│ │ │ких ран, │роорганизмов │P. aeruginosa │ │ │ │

│ │ │кал, моча) │ │165 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -2 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │E. coli 3912/41│10 │46-50 ч │На среде подавляется рост стафилококка, │

│ │ │ │свойства │(О55:К59); │ │(37 +/- 1)│протея, кишечной палочки, на питательном│

│ │ │ │ │S. aureus │ │град. C │агаре наблюдается газонный рост этих │

│ │ │ │ │209-Р; │ │ │микроорганизмов │

│ │ │ │ │P. vulgaris │ │ │ │

│ │ │ │ │HX19222 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 -7 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для выделе-│Чувствитель- │C. diphtheriae │10 , 10 │44-48 ч │Рост в виде изолированных и единичных │

│среда для │НАЯ │ния и диф- │ность среды и│mitis 6765; │ │(37 +/- 1)│колоний. Колонии C. diphtheriae mitis и │

│выделения и │ │ференциации│стабильность │C. diphtheriae │ │град. C │C. ulcerans темно-синие, гладкие, C. │

│дифференциа-│ │коринебак- │основных │gravis 665; │ │ │diphtheriae gravis темно-синие │

│ции корине- │ │терий из │биологических│C. xerosis │ │ │шероховатые, C. xerosis - серовато- │

│бактерий, │ │инфициро- │свойств мик- │1911; │ │ │голубые │

│сухая (среда│ │ванного │роорганизмов │C. ulcerans 675│ │ │ │

│Бучина) │ │материала ├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│ │ │ │Дифференциру-│Смесь (1:1) │10 │ │Четкая дифференциация. На среде │

│ │ │ │ющие свойства│C. diphtheriae │ │ │коринебактерии дифтерии растут в виде │

│ │ │ │ │mitis 6765 и │ │ │темно-синих колоний, дифтероиды образуют│

│ │ │ │ │C. xerosis 1911│ │ │колонии серовато-голубого цвета │

│ │ │ │ │ │ -3 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │S. aureus │10 │ │На среде подавляется рост стафилококка, │

│ │ │ │свойства │Wood-46 │ │ │на питательном агаре наблюдается густой │

│ │ │ │ │ │ │ │рост │

│ │ │ │ │ │ -6 -7 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Выделение │Чувствитель- │C. diphtheriae │10 , 10 │20-48 ч │Рост с образованием через 20-24 ч не │

│среда для │НАЯ │коринебак- │ность среды и│mitis 6765; │ │(37 +/- 1)│менее 20 колоний на одной чашке, через │

│выделения │ │терий из │стабильность │C. diphtheriae │ │град. C │44-48 ч - не менее 30 колоний. Через │

│коринебакте-│ │инфициро- │основных │gravis 665; │ │ │48 ч - 4 колонии C. diphtheriae mitis │

│рий, сухая │ │ванного │биологических│C. xerosis │ │ │темно-серые, гладкие; C. diphtheriae │

│(Коринебак- │ │материала │свойств мик- │1911; │ │ │gravis - темно-серые, шероховатые; │

│агар) │ │ │роорганизмов │C. ulcerans 675│ │ │C. ulcerans и C. xerosis - серовато- │

│ │ │ │ │ │ │ │черные, гладкие │

│ │ │ │ │ │ -3 │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │S. aureus │10 │46-48 ч │На среде подавляется рост стафилококков │

│ │ │ │свойства │Wood-46; │ │(37 +/-1) │и стрептококков, на питательном агаре │

│ │ │ │ │S. pyogenes │ │град. C │наблюдается густой рост │

│ │ │ │ │Dick I │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -5 -4 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для выделе-│Чувствитель- │C. albicans │10 , 10 │23-25 ч │Рост в виде изолированных и единичных │

│среда для │НАЯ │ния грибов │ность среды и│259/NCTC/885/ │ │(37 +/- 1)│колоний. Колонии C. albicans плотные, с │

│выделения │ │Candida из │стабильность │653; │ │град. C │ровными краями, белого цвета, выпуклые, │

│грибов рода │ │патологи- │основных │ │ │ │блестящие; C. brumptii - плотные с │

│Candida, │ │ческого ма-│биологических│C. brumptii │ │47-49 ч │ровными или волнистыми краями, беловато-│

│сухая │ │териала, а │свойств мик- │530/ИБФМ-J-40 │ │(28 +/- 1)│кремового цвета, плоские, с неровной │

│(Кандида- │ │также при │роорганизмов │ │ │град. C │поверхностью. На среде подавляется рост │

│агар) │ │санитарном ├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┤кишечной палочки, протея, стафилококка, │

│ │ │обследова- │Ингибирующие │E. coli 3912 │10 ед. │47-49 ч │на питательном агаре наблюдается │

│ │ │нии объек- │свойства │(О55:К59); │ │(37 +/- 1)│газонный рост этих микроорганизмов │

│ │ │тов внешней│ │S. aureus │ │град. C │ │

│ │ │среды │ │209-Р; │ │ │ │

│ │ │ │ │P. vulgaris │ │ │ │

│ │ │ │ │HX19222 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -3 │ │ │

│Основа │ПЛОТ-│Для │Чувствитель- │U. urealyticum │10 │47-49 ч │Рост в виде типичных изолированных │

│питательной │НАЯ │выделения │ность среды и│(YIII) │ │(37 +/- 1)│колоний │

│среды для │ │уреплазм из│стабильность │ │ │град. C в │ │

│выделения │ │патологи- │основных │ │ │атмосфере │ │

│уреплазм, │ │ческого │биологических│ │ │углекисло-│ │

│сухая │ │материала │свойств мик- │ │ │го газа │ │

│(сульфат- │ │после │роорганизмов │ │ │(5-10%) │ │

│марганцевый │ │добавления ├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│агар) │ │нормальной │ │ │ -3 │ │ │

│ │ │лошадиной │Дифференциру-│U. urealyticum │10 │(37 +/- 1)│Колонии U. urealyticum коричневые, под │

│ │ │сыворотки, │ющие свойства│(YIII) │ │град. C в │микроскопом напоминают яичницу-глазунью.│

│ │ │пенициллина│ │ │ │атмосфере │ │

│ │ │и амфотери-│ │ │ │углекисло-│ │

│ │ │цина В, │ │ │ │го газа │ │

│ │ │мочевины │ │ │ │(5-10%) │ │

│ │ │ │ │ │ │47-49 ч │ │

│ │ │ │ │ │ -5 │ │ │

│ │ │ │ │M. hominis H 31│10 │166-170 │Колонии M. hominis бесцветные, под │

│ │ │ │ │ │ │ч │микроскопом напоминают яичницу-глазунью │

│ Селективные среды для идентификации микроорганизмов │

│Питательная │ПЛОТ-│Для родовой│Дифференциру-│S. paratyphi В │1 бак. │48 ч │Густой рост микроорганизмов, способных │

│среда для │НАЯ │идентифика-│ющие свойства│506; │петля из (1│(37 +/- 1)│утилизировать цитрат в качестве │

│родовой │ │ции энтеро-│ │C. fieundii │петля + 1 │град. C │единственного источника углерода, │

│идентифика- │ │бактерий по│ │34/57; │мл физ. │ │сопровождается изменением цвета среды с │

│ции энтеро- │ │способности│ │E. aerogenes │р-ра) │ │зеленого на синий │

│бактерий, │ │утилизиро- │ │ССМ 2531; │ │ │ │

│сухая (цит- │ │вать цитрат│ │K. pneumoniae │ │ │ │

│ратный агар │ │ │ │5055; │ │ │ │

│Симмонса) │ │ │ │P. mirabilis │ │ │ │

│ │ │ │ │3177 │ │ │ │

│ │ │ │ ├───────────────┤ ├──────────┤ │

│ │ │ │ │P. │ │72 ч │ │

│ │ │ │ │alcalifaciens │ │(37 +/-1) │ │

│ │ │ │ │1035-49; │ │град. C │ │

│ │ │ │ │ │ │ │ │

│ │ │ │ │H. alvei 1 │ │120 ч │ │

│ │ │ │ │ │ │(21 +/- 1)│ │

│ │ │ │ │ │ │град. C │ │

│ │ │ ├─────────────┼───────────────┤ ├──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ │ │ │Ингибирующие │P. morganii 417│ │120 ч │Отсутствие роста микроорганизмов, не │

│ │ │ │свойства │ │ │(37 +/- 1)│способных утилизировать цитрат в │

│ │ │ │ │ │ │град. C │качестве единственного источника │

│ │ │ │ │ │ │ │углерода, цвет среды не изменяется │

│Питательная │ПЛОТ-│Для иденти-│Дифференциру-│E. coli 3912/41│1 бак. │48 ч │Рост микроорганизмов, способных │

│среда для │НАЯ │фикации │ющие свойства│(О55:К59); │петля из (1│(37 +/- 1)│утилизировать ацетат, сопровождается │

│идентифика- │ │энтеробак- │ │K. pneumoniae │петля + 1 │град. C │изменением цвета среды с зеленого на │

│ции энтеро- │ │терий по их│ │К 2 NCTC 5055; │мл физ. │ │синий │

│бактерий, │ │способности│ │E. coli Ewing │р-ра) │72 ч │ │

│сухая │ │утилизиро- │ │"О124:К72" 227 │ │(37 +/- 1)│ │

│(ацетатный │ │вать ацетат│ │ │ │град. C │ │

│агар) │ │натрия │ │ │ │ │ │

│ │ │ │Ингибирующие │S. sonnei │ │48 ч │Отсутствие роста микроорганизмов не │

│ │ │ │свойства │"S-form" │ │(37 +/- 1)│способных утилизировать ацетат, цвет │

│ │ │ │ │ │ │град. C │среды не изменяется │

│ │ │ │ │ │ -3 │ │ │

│Основа │ЖИД- │Для индика-│Дифференциру-│U. urealyticum │10 │46-50 ч │Диффузный рост в пробирках с изменением │

│питательной │КАЯ │ции U. │ющие свойства│(YIII) │ │(37 +/- 1)│цвета среды от зеленого (исходный) до │

│среды для │ │urealyticum│ │ │ │град. C │красно-фиолетового │

│индикации │ │в клиничес-│ │ │ │ │ │

│Ureplasma │ │ком матери-│ │ │ │ │ │

│urealyticum,│ │але после │ │ │ │ │ │

│сухая │ │добавления │ │ │ │ │ │

│ │ │к основе │ │ │ │ │ │

│ │ │питательной│ │ │ │ │ │

│ │ │среды сыво-│ │ │ │ │ │

│ │ │ротки круп-│ │ │ │ │ │

│ │ │ного рога- │ │ │ │ │ │

│ │ │того скота,│ │ │ │ │ │

│ │ │мочевины, │ │ │ │ │ │

│ │ │амфотерици-│ │ │ │ │ │

│ │ │на В и │ │ │ │ │ │

│ │ │пенициллина│ │ │ │ │ │

│ Неселективные среды для предварительной идентификации микроорганизмов │

│ │ │ │ │ │ -6 -7 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для выделе-│Чувствитель- │S. flexneri la │10 , 10 │18-20 ч │Рост в виде изолированных и единичных │

│среда с │НАЯ │ния энтеро-│ность среды и│8516; │ │(37 +/- 1)│колоний. S. flexneri la 8516 в виде │

│эозинметиле-│ │бактерий из│стабильность │E. coli 168/59 │ │град. C │бесцветных, E. coli 168/59 (О111:К58) в │

│новым синим,│ │исследуемо-│основных │(О111:К58) │ │ │виде фиолетовых колоний. S. aureus 209-Р│

│сухая (среда│ │го материа-│биологических├───────────────┤ │ │образует бесцветные или светло-сиреневые│

│Левина) │ │ла и их │свойств мик- │ │ -5 │ │колонии │

│ │ │дифференци-│роорганизмов │S. aureus │10 │(S. aureus│ │

│ │ │ации по │ │209-Р │ │209-Р │ │

│ │ │признаку │ │ │ │48 ч) │ │

│ │ │ферментации├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│ │ │лактозы. На│ │ │ -6 │ │ │

│ │ │среде можно│Дифференциру-│Смесь (1:1) │10 │ │Четкая дифференциация. Лактозоотрица- │

│ │ │выделить │ющие свойства│S. flexneri la │ │ │тельные образуют прозрачные или │

│ │ │коагулазо- │ │8516 и E. coli │ │ │полупрозрачные бесцветные колонии (могут│

│ │ │положитель-│ │168/59 │ │ │образовывать колонии бледно-розового │

│ │ │ные стафи- │ │(О111:К58) │ │ │цвета). Лактозоположительные энтеробак- │

│ │ │лококки │ │ │ │ │терии - не прозрачные от светло- │

│ │ │ │ │ │ │ │сиреневого до фиолетового цвета с │

│ │ │ │ │ │ │ │металлическим блеском или без него │

│Питательная │ПЛОТ-│Для первич-│Дифференциру-│S. flexneri la │1 бак. │18-20 ч │При росте микроорганизмов, ферментирую- │

│среда для │НАЯ │ной иденти-│ющие свойства│8516; │петля из 10│ │щих лактозу, наблюдается пожелтение ско-│

│первичной │ │фикации │ │S. pararyphi A │ед. │ │шенной части агара, глюкозы - пожелтение│

│идентифика- │ │энтеробак- │ │225; │ │ │столбика среды. Газообразование сопро- │

│ции энтеро- │ │терий по │ │E. coli 339 │ │ │вождается образованием пузырьков, разры-│

│бактерий, │ │признаку │ │(О55:К59); │ │ │вов, отслоением от стенок. Рост микро- │

│сухая (среда│ │ферментации│ │A. faecalis 415│ │ │организмов, не ферментирующих лактозу и │

│Ресселя) │ │лактозы и │ │ │ │ │глюкозу, сопровождается посинением сре- │

│ │ │глюкозы │ │ │ │ │ды, либо сохраняется исходный зеленый │

│ │ │ │ │ │ │ │цвет. S. flexneri - пожелтение столбика │

│ │ │ │ │ │ │ │и посинение скошенной части; S. │

│ │ │ │ │ │ │ │paratyphi - пожелтение столбика с │

│ │ │ │ │ │ │ │образованием газа и посинение скошенной │

│ │ │ │ │ │ │ │части; Е. coli - пожелтение всей среды с│

│ │ │ │ │ │ │ │газообразованием; A. faecalis - посине- │

│ │ │ │ │ │ │ │ние всей среды или только скошенной │

│ │ │ │ │ │ │ │части │

│Питательная │ПЛОТ-│Для иденти-│Дифференциру-│S. typhibis- │1 бак. │48 ч │При росте микроорганизмов, ферментирую- │

│среда для │НАЯ │фикации │ющие свойства│muth; │петля │(37 +/- 1)│щих лактозу, наблюдается пожелтение │

│первичной │ │энтеробак- │ │S. paratyphi │ │град. C │скошенной части агара, глюкозы - пожел- │

│идентифика- │ │терий по их│ │В N 8006; │ │ │тение столбика среды. Газообразование │

│ции энтеро- │ │способности│ │S. sonnei │ │ │сопровождается образованием пузырьков, │

│бактерий, │ │ферментиро-│ │"S-form"; │ │ │разрывов, отслоением от стенок. Обра- │

│сухая (агар │ │вать лакто-│ │E. coli (О55: │ │ │зование H2S сопровождается почернением │

│Клиглера) │ │зу, глюко- │ │К59) 3912/41; │ │ │среды в столбике, а при слабом образова-│

│ │ │зу, образо-│ │P. inconstans │ │ │нии - почернением на грани столбика и │

│ │ │вывать газ │ │1068-50; │ │ │"косяка" или, реже, на дне пробирки. │

│ │ │и серо- │ │P. mirabilis │ │ │Рост микроорганизмов, не ферментирующих │

│ │ │водород │ │Сиднеев; │ │ │лактозу и глюкозу, не влияет на исходный│

│ │ │ │ │P. aeruginosa │ │ │(красный) цвет среды. Лактоза, глюкоза, │

│ │ │ │ │613-60 │ │ │газ, H2S: S. typhibismuth: - + - + │

│ │ │ │ │ │ │ │слабо; S. paratyphi: - + (маскируется) +│

│ │ │ │ │ │ │ │+; S. sonnei: - + - -; E. coli: + + + -;│

│ │ │ │ │ │ │ │P. inconst: - + + слабо -; P. mirabilis:│

│ │ │ │ │ │ │ │- + (маскируется) + +; P. aeruginosa: │

│ │ │ │ │ │ │ │- - - - │

│Питательная │ПЛОТ-│Для иденти-│Дифференциру-│S. sonnei │1 бак. │72 ч │Рост микроорганизмов, утилизирующих │

│среда для │НАЯ │фикации │ющие свойства│"S-form"; │петля │(37 +/- 1)│цитрат (E. coli и P. alcalifaciens), │

│идентифика- │ │энтеробак- │ │E. coli Ewing │ │град. C │сопровождается изменением цвета среды с │

│ции энтеро- │ │терий по их│ │0124 К72 227; │ │72 ч │желтого на розово-красный. При росте │

│бактерий, │ │способности│ │P. alcalifa- │ │(37 +/- 1)│микроорганизмов, не утилизирующих цитрат│

│сухая │ │утилизиро- │ │ciens 1068-50 │ │град. C │(S. sonnei), цвет среды не изменяется │

│(цитратный │ │вать цитрат│ │ │ │24 ч │ │

│агар │ │натрия в │ │ │ │(37 +/- 1)│ │

│Кристенсена)│ │присутствии│ │ │ │град. C │ │

│ │ │органичес- │ │ │ │ │ │

│ │ │кого азота │ │ │ │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для первич-│Дифференциру-│S. flexneri la │1 бак. │20-24 ч │При росте микроорганизмов, ферментирую- │

│среда для │НАЯ │ной иденти-│ющие свойства│8516; │петля │(37 +/- 1)│щих глюкозу, наблюдается пожелтение │

│идентифика- │ │фикации │ │E. coli (О55: │ │град. C │столбика среды (для некоторых культур, │

│ции энтеро- │ │энтеробак- │ │К59) 3912/41; │ │ │например шигелл и некоторых сальмонелл, │

│бактерий, │ │терий по их│ │P. vulgaris │ │ │возможно пожелтение "по уколу" или │

│сухая │ │способности│ │HX19222; │ │ │оранжевое окрашивание столбика). │

│(железо- │ │ферментиро-│ │C. freundii │ │ │Газообразование сопровождается разрывами│

│глюкозо- │ │вать глюко-│ │58/57; │ │ │(появлением пузырьков) в столбике среды.│

│лактозный │ │зу и лакто-│ │S. typhi H-901 │ │ │В случае ферментации лактозы происходит │

│агар, │ │зу, образо-│ │ГДР/ГИСК │ │ │пожелтение скошенной части среды. В │

│двухслойный)│ │вывать се- │ │ │ │ │случае образования сероводорода │

│ │ │роводород и│ │ │ │ │наблюдается почернение верхней части │

│ │ │расщеплять │ │ │ │ │столбика. Расщепление мочевины (при │

│ │ │мочевину │ │ │ │ │добавлении ее ex tempore) сопровождается│

│ │ │(мочевину │ │ │ │ │изменением в малиновый цвет всей среды │

│ │ │добавляют к│ │ │ │ │или только скошенной ее части. При этом │

│ │ │среде ex │ │ │ │ │может наблюдаться маскировка ферментации│

│ │ │tempore) │ │ │ │ │глюкозы и лактозы. Глюкоза, лактоза, │

│ │ │ │ │ │ │ │H2S, мочевина: S. flexneri: + - - -; │

│ │ │ │ │ │ │ │E. coli: + газ + - -; P. vulgaris: + │

│ │ │ │ │ │ │ │(маскируется) + (маскируется) + +; │

│ │ │ │ │ │ │ │C. fieundii: + (газ) + + -; │

│ │ │ │ │ │ │ │S. typhi: + - + - │

│Питательная │ПЛОТ-│Для родовой│Дифференциру-│P. vulgaris │1 бак. │20-24 ч │Внесение 2-3 капель 10% FeCl на │

│среда для │НАЯ │идентифика-│ющие свойства│HX19222; │петля │(37 +/- 1)│ 3 │

│родовой │ │ции энтеро-│ │E. coli │ │град. C │выросшую культуру микроорганизмов, де- │

│идентифика- │ │бактерий по│ │(О55:К59) │ │ │заминирующих фенилаланин (P. vulgaris), │

│ции энтеро- │ │способности│ │3912/41 │ │ │изменяет цвет среды с желтого на │

│бактерий, │ │дезаминиро-│ │ │ │ │зеленый, не дезаминирующих (E. coli) - │

│сухая │ │вать фенил-│ │ │ │ │не изменяет цвет среды │

│(фенилаланин│ │аланин │ │ │ │ │ │

│агар) │ │ │ │ │ │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для иденти-│Дифференциру-│S. flexneri la │1 бак. │18-20 ч │При росте микроорганизмов, ферментирую- │

│среда для │НАЯ │фикации │ющие свойства│8516; │петля из │(37 +/- 1)│щих углевод, наблюдается изменение цвета│

│идентифика- │ │энтеробак- │ │E. coli │10 ед. │град. C │среды с розового на синий или голубой. │

│ции энтеро- │ │терий по │ │3912/41 │ │ │Газообразование сопровождается появлени-│

│бактерий, │ │тесту │ │(О55:К59); │ │ │ем пузырьков в столбике среды или на ее │

│сухая (среда│ │ферментации│ │S. dysenteriael│ │ │поверхности. Рост микроорганизмов, не │

│Гисса) с: │ │одного из │ │1362; │ │ │ферментирующих углевод, не изменяет цвет│

│а/лактозой; │ │углеводов │ │P. vulgaris │ │ │среды. │

│б/глюкозой; │ │(лактозы, │ │HX19222; │ │ │ Глюк. лакт. сах. мальт. ман.│

│в/сахарозой;│ │глюкозы, │ │K. pneumoniae │ │ │S. flexneri К - - К К │

│г/мальтозой;│ │сахарозы, │ │3534/51; │ │ │E. coli КГ КГ - КГ КГ │

│д/маннитом │ │мальтозы) │ │S. typhi 65; │ │ │S. dysent К - - К - │

│ │ │или много- │ │S. aureus │ │ │ слабо │

│ │ │атомного │ │"Виотко" │ │ │P. vulgaris КГ - КГ КГ - │

│ │ │спирта │ │ │ │ │K. pneum КГ КГ КГ КГ КГ │

│ │ │маннита │ │ │ │ │S. typhi К - - К К │

│ │ │ │ │ │ │ │S. aureus К К К К К │

│Питательная │ПЛОТ-│Для родовой│Дифференциру-│E. aerogenes │1 бак. │18-20 ч │Рост микроорганизмов, утилизирующих │

│среда для │НАЯ │идентифика-│ющие свойства│3/43; │петля │(37 +/- 1)│малонат натрия (E. aerogenes и K. │

│родовой │ │ции энтеро-│ │K. pneumoniae │ │град. C │pneumoniae), сопровождается изменением │

│идентифика- │ │бактерий по│ │204; │ │ │цвета среды с зеленого на синий. Рост │

│ции энтеро- │ │тесту │ │E. coli 3912/41│ │ │микроорганизмов, не утилизирующих мало- │

│бактерий, │ │утилизации │ │(О55:К59); │ │ │нат натрия (E. coli и P. inconstans), не│

│сухая (ма- │ │малоната │ │P. inconstans │ │ │изменяет цвет среды │

│лонат агар) │ │натрия │ │1035-49 │ │ │ │

│Питательная │ЖИД- │Для родовой│Дифференциру-│E. coli 675; │1 бак. │20-24 ч │Рост микроорганизмов в виде диффузного │

│среда для │КАЯ │идентифика-│ющие свойства│E. aerogenes │петля │(37 +/- 1)│помутнения. Проявление признака в │

│родовой │ │ции энтеро-│ │2531; │ │град. C │последующем тесте с метиловым красным и │

│идентифика- │ │бактерий по│ │ │ │20-24 ч │реакции Фогеса-Проскауэра сопровождается│

│ции энтеро- │ │тесту с │ │H. alvei 1 │ │(22 +/- 1)│изменением цвета среды из желтого в │

│бактерий, │ │метиловым │ │ │ │град. C │красный. Отсутствие признака в данных │

│сухая │ │красным и в│ │ │ │ │тестах не сопровождается изменением │

│(глюкозо- │ │реакции │ │ │ │ │цвета среды. │

│фосфатный │ │Фогеса- │ │ │ │ │ Метиловый Фогеса- │

│бульон) │ │Проскауэра │ │ │ │ │ красный Проскауэра │

│ │ │ │ │ │ │ │E. coli + - │

│ │ │ │ │ │ │ │E. aeroganes - + │

│ │ │ │ │ │ │ │H. alvei 1 - + │

│ │ │ │ │ │ -1 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для │Чувствитель- │E. coli АТСС │10 │18-20 ч │Рост в виде газона с четкими зонами │

│среда для │НАЯ │определения│ность микро- │25922; │ │(37 +/- 1)│угнетения роста антибиотиками (амикацин,│

│определения │ │чувстви- │организмов к │S. aureus АТСС │ │град. C │бензилпенициллин, ванкомицин, стрептоми-│

│чувствитель-│ │тельности │антибиотикам │25923; │ │ │цин, гентамицин, тетрациклин, эритроми- │

│ности микро-│ │микробов к │ │P. aeruginosa │ │ │цин, левомицетин, полимиксин-М) │

│бов к анти- │ │антибиоти- │ │АТСС 27853 │ │ │соответствующего диаметра │

│биотикам, │ │кам │ │ │ │ │ │

│сухая (среда│ │ │ │ │ │ │ │

│АГВ) │ │ │ │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для │Чувствитель- │E. coli АТСС │10 │18-20 ч │Рост в виде изолированных колоний │

│среда для │НАЯ │определения│ность среды и│25922, │ │(37 +/- 1)│ │

│определения │ │чувстви- │стабильность │S. aureus АТСС │ │град. C │ │

│чувствитель-│ │тельности │основных │25923, │ │ │ │

│ности микро-│ │микроорга- │биологических│P. aeruginosa │ │ │ │

│организмов к│ │низмов к │свойств мик- │АТСС 27853, │ │ │ │

│противомик- │ │противомик-│роорганизмов │E. faecalis │ │ │ │

│робным ле- │ │робным ле- ├─────────────┤АТСС 29212 ├───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│карственным │ │карственным│ │ │ -1 │ │ │

│средствам, │ │средствам │Показатель │ │10 │ │Рост в виде газона с четкими зонами │

│сухая │ │ │чувствитель- │ │ │ │угнетения роста противомикробными лек. │

│(Мюллера- │ │ │ности микро- │ │ │ │средствами (бензилпенициллин, кар- │

│Хинтон агар)│ │ │организмов к │ │ │ │бенициллин, стрептомицин, доксициклин, │

│ │ │ │противомик- │ │ │ │гентамицин, левомицетин, спарфлоксацин, │

│ │ │ │робным │ │ │ │цефуроксим, ципрофлоксацин, эритромицин)│

│ │ │ │лекарственным│ │ │ │соответствующего диаметра │

│ │ │ │средствам │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -1 │ │ │

│ │ │ │Двухвалентные│P. aeruginosa │10 │ │Рост в виде газона с четкой зоной (16- │

│ │ │ │катионы │АТСС 27853 │ │ │21 мм) угнетения роста гентамицином (МПК│

│ │ │ │ 2+ 2+ │ │ │ │0,5-2,0 мкг) │

│ │ │ │(Ca Mg ) │ │ │ │ │

│ │ │ ├─────────────┼───────────────┤ │ ├────────────────────────────────────────┤

│ │ │ │Тимин и │E. coli АТСС │ │ │Рост в виде газона с четкой зоной (> 20 │

│ │ │ │тимидин │25922, │ │ │мм) угнетения роста сульфометаксазолом │

│ │ │ │ │S. aureus АТСС │ │ │(диск 300 мкг) │

│ │ │ │ │25923 │ │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для иденти-│Стабильность │P. aeruginosa │1 бак. │23-25 ч │Рост тест-штаммов сопровождается │

│среда для │НАЯ │фикации по │основных │165; │петля из │(37 +/- 1)│образованием пигмента (пиоцианина) с │

│идентифика- │ │признаку │биологических│P. aeruginosa │суспенз. │град. C │окрашиванием среды в зеленый или │

│ции сине- │ │пигменто- │свойств мик- │5/Перкадзе; │(2 петли в │ │сине-зеленый цвет │

│гнойной па- │ │образования│роорганизмов │P. aeruginosa │2 мл физ. │ │ │

│лочки, сухая│ │вида P. │ │68; │р-ра) │ │ │

│ │ │aeruginosa │ │P. aeruginosa │ │ │ │

│ │ │ │ │140; │ │ │ │

│ │ │ │ │P. aeruginosa │ │ │ │

│ │ │ │ │615 │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для выделе-│Чувствитель- │B. pertussis │10 и │70-72 ч │Рост тест-штаммов в виде изолированных │

│среда для │НАЯ │ния коклюш-│ность среды и│N 649; 79; 39; │ -6 │(37 +/- 1)│мелких выпуклых, гладких, круглых с │

│выделения и │ │ного микро-│стабильность │703; 688; 796; │10 , │град. C │розовыми краями, блестящих ("жемчужины")│

│культивиро- │ │ба из инфи-│основных │143 │разведенное│ │колоний │

│вания кок- │ │цированного│биологических│ │в 4 раза │ │ │

│люшного мик-│ │материала и│свойств мик- │ │ │ │ │

│роба, сухая │ │культивиро-│роорганизмов │ │ │ │ │

│(КУА) │ │вания │ │ │ │ │ │

│ │ │штаммов │ │ │ │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для иденти-│Стабильность │C. albicans │1 бак. │23-25 ч │У C. albicans образование хламидоспор и │

│среда для │НАЯ │фикации │основных │610/1563; │петля из │(27 +/- 1)│отсутствие хламидоспор у C. tropicalis. │

│идентифика- │ │грибов вида│биологических│C. albicans │суспенз. │град. C │Учет производится при микроскопировании │

│ции грибов │ │Candida │свойств мик- │615/1708; │(2 бак. │ │посевов в проходящем свете при увеличе- │

│вида Candida│ │albicans по│роорганизмов │C. tropicalis │петли в 0,2│ │нии (х100 - х200). На питательной среде │

│albicans, │ │тесту хла- │ │151/1-017-АТСС-│мл физ. │ │по краям полосок посева выявляются спе- │

│сухая (хла- │ │мидоспоро- │ │7347 │р-ра) │ │цифические морфологические образования -│

│мидоспор │ │образования│ │ │ │ │хламидоспоры, которые четко дифференци- │

│агар) │ │ │ │ │ │ │руются от дрожжевых клеток правильно- │

│ │ │ │ │ │ │ │округлой формой, двухконтурной оболоч- │

│ │ │ │ │ │ │ │кой, зернистостью в центре, расположени-│

│ │ │ │ │ │ │ │ем чаще на конце нити псевдомицелия │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ЖИД- │Для выделе-│Чувствитель- │S. pyogenes │10 │24-48 ч │Стрептококки серогруппы "А" дают рост в │

│среда для │КАЯ │ния стреп- │ность среды и│гр. "А" N 682; │ │(37 +/- 1)│виде взвешенных частиц, придонного или │

│выделения │ │тококков из│стабильность │S. agalactiae │ │град. C │придонно-пристеночного осадка с сохране-│

│стрептокок- │ │крови и │основных │гр. "В" O-90R │ │ │нием прозрачности самой среды; стрепто- │

│ков сухая │ │другого │биологических├───────────────┼───────────┤ │кокки группы "В" дают рост в виде при- │

│<*> │ │инфициро- │свойств мик- │ │ -7 │ │донного осадка с диффузным помутнением │

│ │ │ванного │роорганизмов │S. bovis │10 │24 ч │среды; стрептококки группы "Д" дают рост│

│ │ │материала │ │гр. "Д" │ │(37 +/- 1)│в виде вязкого слизистого осадка и │

│ │ │ │ │NCTC 8177 │ │град. C │диффузного помутнения среды │

│ <*> Для приготовления селективного варианта к готовой среде необходимо добавить ex tempore генцианвиолет. │

│Питательная │ПЛОТ-│Для иденти-│Стабильность │C. diphtheriae │1 бак. │18-20 ч │Почернение среды по ходу укола и │

│среда для │НАЯ │фикации │основных │mitis │петля │(37 +/- 1)│образование облачка коричневого цвета в │

│идентифика- │ │коринебак- │биологических│nontoxigenic │ │град. C │глубине столбика среды указывает на │

│ции корине- │ │терий по │свойств мик- │203 АГ; │ │ │наличие фермента цистиназы (положитель- │

│бактерий по │ │тесту рас- │роорганизмов │C. diphtheriae │ │ │ная реакция) (C. diphtheriae mitis │

│тесту │ │щепления │ │gravis 75; │ │ │nontoxigenic и C. diphtheriae gravis). │

│расщепления │ │цистина │ │C. xerosis │ │ │При отрицательной реакции цвет среды не │

│цистина, │ │ферментом │ │1911; │ │ │меняется (C. xerosis и │

│сухая │ │цистиназой │ │C. pseudo- │ │ │C. pseudodiphtheriticum) │

│ │ │ │ │diphtheriticum │ │ │ │

│ │ │ │ │"Соколов" │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для выделе-│Чувствитель- │E. coli 3912/41│10 │17-21 ч │Рост в виде изолированных колоний. │

│среда для │НАЯ │ния и диф- │ность среды и│(О55:К59); │ │(37 +/- 1)│Колонии E. coli и E. faecalis желтые, │

│выделения, │ │ференциации│стабильность │S. ryphimurium │ │град. C │P. mirabilis и P. vulgaris прозрачные, │

│дифференциа-│ │микроорга- │основных │79; │ │ │голубые в О-форме без "роения", │

│ции и коли- │ │низмов по │биологических│P. mirabilis │ │ │допускаются отдельные колонии в Н-форме │

│чественного │ │признаку │свойств мик- │F-392; │ │ │("роение") │

│определения │ │ферментации│роорганизмов │P. vulgaris │ │ │ │

│бактерий в │ │лактозы, │ │HX19 │ │ │ │

│моче элект- │ │определения│ ├───────────────┤ │ │ │

│ролитдефи- │ │степени │ │ │ -5 │ │ │

│цитная, │ │бактериурии│ │E. faecalis 775│10 │ │ │

│сухая (ЭДПА)│ │при иссле- ├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├────────────────────────────────────────┤

│ │ │довании │ │ │ -6 │ │ │

│ │ │мочи │Дифференциру-│Смесь (1:1) │10 │ │Четкая дифференциация. Лактозоположи- │

│ │ │ │ющие свойства│E. coli 3912/41│ │ │тельные микроорганизмы образуют колонии │

│ │ │ │ │и P. mirabilis │ │ │желтого цвета, лактозоотрицательные - │

│ │ │ │ │F-392 │ │ │прозрачные, голубые │

│ │ │ │ │ │ -6 -7 │ │ │

│Питательная │ПОЛУ-│Для контро-│Чувствитель- │A. faecalis 415│10 , 10 ,│24-48 ч │Рост C. novyi 198 в виде отдельных шаро-│

│среда для │ЖИД- │ля стериль-│ность среды и│ │ -8 │(34-35) │образных колоний через 24 ч и диффузного│

│контроля │КАЯ │ности меди-│стабильность │ │10 │град. C │помутнения с выраженной прозрачной зоной│

│стерильно- │ │цинских им-│основных │ │ │ │в верхней части столбика через 48 ч, не │

│сти, сухая │ │мунобиоло- │биологических├───────────────┼───────────┤ │менее чем в 2 пробирках из разведений │

│(тиогликоле-│ │гических │свойств мик- │ │ -3 -4 │ │ -4 -5 │

│вая среда) │ │препаратов │роорганизмов │C. novyi 198 │10 , 10 │ │10 , 10 . Рост A. faecalis 415 в виде │

│ │ │(МИБП)с │ │ │ -5 │ │помутнения верхней части столбика среды,│

│ │ │целью выяв-│ │ │10 │ │менее чем в 2-х пробирках из разведений │

│ │ │ления воз- │ │ │ │ │ -7 -8 │

│ │ │можной их │ │ │ │ │10 , 10 │

│ │ │контамина- ├─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼────────────────────────────────────────┤

│ │ │ции аэроб- │ │ │ -6 -7 │ │ │

│ │ │ными и ана-│Нейтрализу- │A. faecalis 415│10 , 10 ,│5 суток │Рост не менее чем в 2 пробирках из │

│ │ │эробными │ющие свойства│ │ -8 │34-35 │ -7 │

│ │ │бактериями │(при предва- │ │10 │град. C │разведения 10 │

│ │ │и грибами │рительном │ │ │ │ │

│ │ │ │внесении в │ │ │ │ │

│ │ │ │каждую про- │ │ │ │ │

│ │ │ │бирку по 0,5 │ │ │ │ │

│ │ │ │мл 0,01%-го │ │ │ │ │

│ │ │ │р-ра мертио- │ │ │ │ │

│ │ │ │лята) │ │ │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для опреде-│Стабильность │C. diphtheriae │1 бак. │22-24 ч │Рост всех штаммов и образование линий │

│среда для │НАЯ │ления ток- │основных │gravis 75; │петля │(37 +/- 1)│преципитации токсигенными штаммами │

│определения │ │сигенности │биологических│C. diphtheriae │ │град. C │ │

│токсигенно- │ │дифтерийных│свойств мик- │mitis Сеньков; │ │ │ │

│сти дифте- │ │микробов │роорганизмов │C. diphtheriae │ │ │ │

│рийных мик- │ │методом │ │intermedius │ │ │ │

│робов, сухая│ │диффузной │ │619; │ │ │ │

│(среда ОТДМ,│ │преципита- │ │C. diphtheriae │ │ │ │

│Коринетокс- │ │ции в студ-│ │gravis nonto- │ │ │ │

│агар) │ │не среды │ │xigenis 4895; │ │ │ │

│ │ │ │ │C. diphtheriae │ │ │ │

│ │ │ │ │mitis nonto- │ │ │ │

│ │ │ │ │xigenic 3689; │ │ │ │

│ │ │ │ │C. diphtheriae │ │ │ │

│ │ │ │ │intermedius │ │ │ │

│ │ │ │ │nontoxigenic │ │ │ │

│ │ │ │ │7227 │ │ │ │

│ Селективные накопительные среды │

├────────────┬─────┬───────────┬─────────────┬───────────────┬───────────┬──────────┬───────────┬────────────────────────────┤

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │ │

│Питательная │ЖИД- │Для накоп- │Показатель │S. paratyphi │10 │6 ч │Не менее │Учет производят по │

│среда для │КАЯ │ления саль-│эффективности│В 506 │ │(37 +/- 1)│чем в 5 раз│количеству колоний, выросших│

│накопления │ │монелл при ├─────────────┼───────────────┼───────────┤град. C ├───────────┤на чашках со средой Эндо │

│сальмонелл, │ │исследова- │ │ │ -5 │ │ │ │

│сухая (селе-│ │нии различ-│Показатель │Смесь (1:1) │10 │ │Не менее │ │

│нитовая │ │ного мате- │ингибиции │E. coli 3912/41│ │ │чем в 1,5 │ │

│среда │ │риала (исп-│ │(О55:К59) + │ │ │раза │ │

│Лейфсона) │ │ражнения, │ │S. paratyphi │ │ │ │ │

│ │ │моча и др.)│ │В 506 │ │ │ │ │

├────────────┼─────┼───────────┼─────────────┼───────────────┼───────────┼──────────┼───────────┼────────────────────────────┤

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │ │

│Питательный │ЖИД- │Для элек- │Показатель │S. paratyphi │10 │20-24 ч │Не менее │Учет производят по │

│бульон для │КАЯ │тивного │эффективности│В 506 │ │(37 +/- 1)│чем в 10000│количеству колоний, выросших│

│элективного │ │накопления │ │ │ │град. C │раз │на чашках со средой Эндо │

│накопления │ │сальмонелл ├─────────────┼───────────────┼───────────┤ ├───────────┤ │

│сальмонелл, │ │из различ- │ │ │ -5 │ │ │ │

│сухой (МА- │ │ного инфи- │Показатель │Смесь (1:1) │10 │ │Не менее │ │

│бульон) │ │цированного│ингибиции │E. coli 3912/41│ │ │чем в 100 │ │

│ │ │материала с│ │(О55:К59) + │ │ │раз │ │

│ │ │последующим│ │S. paratyphi │ │ │ │ │

│ │ │высевом на │ │В 506 │ │ │ │ │

│ │ │дифферен- │ │ │ │ │ │ │

│ │ │циально- │ │ │ │ │ │ │

│ │ │диагности- │ │ │ │ │ │ │

│ │ │ческие │ │ │ │ │ │ │

│ │ │среды │ │ │ │ │ │ │

├────────────┴─────┴───────────┴─────────────┴───────────────┴───────────┴──────────┴───────────┴────────────────────────────┤

│ Транспортные среды │

│ │ │ │ │ │ -5 -6 │ │ │

│Транспортная│ПОЛУ-│Транспорти-│Показатели │S. aureus │10 , 10 │24 ч │Отсутствие размножения. Число колоний │

│среда для │ЖИД- │рование ис-│жизнеспособ- │25923, │ │18-25 │после 24 ч хранения не различается более│

│различных │КАЯ │следуемого │ности и │E. coli 25922, │ │град. C │чем на порядок. Типичный рост микроорга-│

│микроорга- │ │биоматериа-│стабильности │H. influenzae │ │ │низмов при высеве на питательные агары │

│низмов, │ │ла от │основных │49247, │ │ │ │

│полужидкая, │ │момента его│биологических│S. pneumoniae │ │ │ │

│готовая к │ │забора до │свойств мик- │49619 │ │ │ │

│применению │ │посева при │роорганизмов ├───────────────┼───────────┤ │ │

│(среда типа │ │сохранении │при задержке │ │ -4 -5 │ │ │

│Эймса) │ │жизнеспо- │роста │C. albicans │10 , 10 │ │ │

│ │ │собности и │ │24433 │ │ │ │

│ │ │отсутствии │ │ │ │ │ │

│ │ │размножения│ │ │ │ │ │

│ │ │различных │ │ │ │ │ │

│ │ │микроорга- │ │ │ │ │ │

│ │ │низмов, │ │ │ │ │ │

│ │ │включая │ │ │ │ │ │

│ │ │стрептокок-│ │ │ │ │ │

│ │ │ки, стафи- │ │ │ │ │ │

│ │ │лококки, │ │ │ │ │ │

│ │ │эшерихии, │ │ │ │ │ │

│ │ │гемофильные│ │ │ │ │ │

│ │ │бактерии, │ │ │ │ │ │

│ │ │дрожже- │ │ │ │ │ │

│ │ │подобные │ │ │ │ │ │

│ │ │грибы │ │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -5, -6 │ │ │

│Питательная │ПЛОТ-│Для │Показатели │C. jejuni │10 10 │70-74 ч │Типичный рост на кровяном эритрит агаре.│

│среда для │НАЯ │хранения и │жизнеспособ- │СТС 11168, │ │2-8 │Число колоний после 74 ч хранения на │

│кампилобак- │ │транспорти-│ности при за-│C. coli IIL24 │ │град. C │транспортной среде ниже на один порядок │

│терий транс-│ │рования ис-│держке роста │ │ │ │ │

│портная, │ │следуемого │и стабильнос-│ │ │ │ │

│сухая │ │материала │ти основных │ │ │ │ │

│ │ │при диагно-│биологических│ │ │ │ │

│ │ │стике кам- │свойств мик- │ │ │ │ │

│ │ │пилобакте- │роорганизмов │ │ │ │ │

│ │ │риоза │ │ │ │ │ │

│ Неселективные основы и добавки │

├────────────┬─────┬───────────┬─────────────┬───────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┤

│Гидролизат │- │Использова-│В составе │См. "Питательная среда для контроля стерильности, сухая (тиогликолевая среда)" │

│казеина │ │ние при из-│тиогликолевой│ │

│неглубокой │ │готовлении │среды должен │ │

│степени │ │микробиоло-│обеспечивать │ │

│расщепления │ │гических │качество этой│ │

│ферментатив-│ │питательных│среды в отно-│ │

│ный, сухой. │ │сред. │шении тест- │ │

│ │ │Гидролизат │штамма │ │

│Экстракт │ │казеина в │Clostridium │ │

│кормовых │ │качестве │novyi 198 │ │

│дрожжей для │ │белковой │ │ │

│микробиоло- │ │основы. ЭКД│ │ │

│гических │ │в качестве │ │ │

│питательных │ │ростового │ │ │

│сред, сухой │ │фактора │ │ │

│(ЭКД) │ │(водо- │ │ │

│ │ │растворимые│ │ │

│ │ │витамины │ │ │

│ │ │группы В, │ │ │

│ │ │свободные │ │ │

│ │ │аминокисло-│ │ │

│ │ │ты) │ │ │

├────────────┼─────┼───────────┼─────────────┼───────────────┬───────────┬──────────┬────────────────────────────────────────┤

│Гидролизат │- │Использова-│- │- │- │- │- │

│казеина │ │ние в каче-│ │ │ │ │ │

│средней │ │стве белко-│ │ │ │ │ │

│степени │ │вой основы │ │ │ │ │ │

│расщепления │ │при изго- │ │ │ │ │ │

│кислотный, │ │товлении │ │ │ │ │ │

│сухой │ │питательных│ │ │ │ │ │

│ │ │сред, │ │ │ │ │ │

│ │ │применяемых│ │ │ │ │ │

│ │ │для культи-│ │ │ │ │ │

│ │ │вирования │ │ │ │ │ │

│ │ │анаэробов с│ │ │ │ │ │

│ │ │целью полу-│ │ │ │ │ │

│ │ │чения ток- │ │ │ │ │ │

│ │ │синов │ │ │ │ │ │

├────────────┼─────┼───────────┼─────────────┼───────────────┴───────────┴──────────┴────────────────────────────────────────┤

│Основа бак- │- │В качестве │Препарат в │См. "Питательный бульон для культивирования микроорганизмов (мясо-пептонный │

│териологи- │ │питательной│количестве │бульон)" и "Питательный агар для культивирования микроорганизмов (мясо- │

│ческих пита-│ │основы (по │15,0 г/л │пептонный агар)" │

│тельных │ │аналогии с │(ГМФ) и 10,0 │ │

│сред, сухая │ │пептоном) │г/л (пептон) │ │

│(гидролизат │ │для приго- │в составе │ │

│мяса фермен-│ │товления │мясо-пептон- │ │

│тативный - │ │бактериоло-│ного бульона │ │

│ГМФ), пептон│ │гических │и мясо-пеп- │ │

│для бактери-│ │питательных│тонного агара│ │

│ологических │ │сред при │должен обес- │ │

│питательных │ │выделении, │печивать их │ │

│сред, сухой │ │культивиро-│качество │ │

│ │ │вании и │ │ │

│ │ │идентифика-│ │ │

│ │ │ции различ-│ │ │

│ │ │ных микро- │ │ │

│ │ │организмов │ │ │

│ │ │ │ │ │ -6 │ │ │

│Кровь │ЖИД- │Для │Препарат в │S. aureus │10 │22-24 ч │Типичный рост │

│баранья │КАЯ │обогащения │количестве 5%│Wood-46 │ │(37 +/- 1)│ │

│дефибриниро-│ │бактериоло-│в составе СПА│S. aureus N 5 │ │град. C │ │

│ванная для │ │гических │должен │S. pyogenes │ │ │ │

│питательных │ │питательных│обеспечивать │Dick-1 │ │ │ │

│сред, │ │сред и │типичный рост│E. faecalis │ │ │ │

│стерильная │ │определения│тест-штаммов │7/62 │ │ │ │

│ │ │гемолити- │ │ │ -5 │ │ │

│ │ │ческой │ │S. pneumoniae │10 │40-48 ч │ │

│ │ │активности │ │m3 N 3 │ │(37 +/- 1)│ │

│ │ │микро- │ │ │ │град. C │ │

│ │ │организмов │ │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ │ -5 -6 │ │ │

│Сыворотка │ЖИД- │Для добав- │В количестве │C. diphtheriae │10 , 10 │44-48 ч │Типичный рост │

│лошадиная │КАЯ │ления в │20% в составе│mitis nontoxy- │ │(37 +/- 1)│ │

│нормальная │ │бактериоло-│СПА pH = 7,6 │genic 203-АГ; │ │град. C │ │

│для бактери-│ │гические │должна │S. pyogenes │ │ │ │

│ологических │ │питательные│обеспечивать │Dick I │ │ │ │

│питательных │ │среды, │рост и │ │ │ │ │

│сред. │ │применяемые│стабильность │ │ │ │ │

│ │ │для культи-│основных │ │ │ │ │

│Сыворотка │ │вирования │биологических│ │ │ │ │

│лошадиная │ │микроорга- │свойств мик- │ │ │ │ │

│нормальная │ │низмов │роорганизмов │ │ │ │ │

│для культи- │ │(коринебак-├─────────────┼───────────────┴───────────┴──────────┴────────────────────────────────────────┤

│вирования │ │терий, │В составе │См. "Среда ОТДМ" │

│микро- │ │стрептокок-│среды ОТДМ не│ │

│организмов │ │ков и др.) │должна подав-│ │

│ │ │ │лять образо- │ │

│ │ │ │вание токсина│ │

│ │ │ │токсигенными │ │

│ │ │ │штаммами │ │

└────────────┴─────┴───────────┴─────────────┴───────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┘