ПОСТОЯННЫЙ КОМИТЕТ ПО КОНТРОЛЮ НАРКОТИКОВ

 

УТВЕРЖДЕНЫ

Постоянным комитетом

по контролю наркотиков

18 августа 1994 г.,

Протокол N 32

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

 

КРИМИНАЛИСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОПИЙНОГО И

МАСЛИЧНОГО МАКОВ <*>

--------------------------------

<*> Разработчики: А.В.Гаевский, Е.В.Коваленко (НПО "ВИЛАР"), В.Г.Савенко, Е.П.Семкин, В.И.Сорокин (ЭКЦ МВД РФ).

 

МЕТОДИКА ЭКСПЕРТНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

 

Принцип химической диагностики снотворного мака основан на обнаружении с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле алкалоидов наркотолина, наркотина и ретикулина:

- при наличии наркотолина либо при полном отсутствии наркотина и наркотолина образец относят к маку масличному;

- при наличии значительного количества наркотина (более 15-20% от морфина) и полном отсутствии наркотолина образец относят к маку опийному;

- при наличии ретикулина образец относят к украинским сортам масличного мака. (Этот признак используется в качестве дополнительного.)

Для обнаружения наркотолина, ретикулина и других фенольных алкалоидов мака снотворного авторами разработан способ проявления хроматографических пластинок раствором стабилизированной соли диазония - прочного синего Б, ранее применявшийся только для обнаружения каннабиноидов. Этот способ существенно повышает чувствительность и селективность анализа и в сочетании с реактивом Драгендорфа позволяет однозначно идентифицировать наркотолин и ретикулин без применения эталонных веществ.

Правомочность применения предлагаемого принципа химической диагностики и его методического решения подтверждена в процессе серийной оценки образцов мировой коллекции мака, а также местных форм из различных районов страны.

Предлагаемая методика анализа образцов мака состоит из этапов: экстракции алкалоидов хлороформом, количественного (или полуколичественного) определения морфина любым общепринятым методом и последующего обнаружения сопутствующих морфину алкалоидов (наркотолина, наркотина, ретикулина) с помощью тонкослойной хроматографии.

Перед началом исследования необходимо выяснить, относится ли представленное на исследование растение к маку снотворному. Для этого методом тонкослойной хроматографии определяют наличие в исследуемом объекте морфина, кодеина, тебаина. Наличие этого комплекса признаков позволяет отнести растение к маку снотворному.

Подготовка проб для анализа. Исследуемый объект измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Влажную солому мака предварительно высушивают в сушильном шкафу (желательно с принудительной вентиляцией) при температуре 50-60 град. C.

Затем 2 г измельченной растительной массы помещают в коническую колбу вместимостью 200 мл с пришлифованной пробкой, приливают 5,0 мл 5% раствора карбоната калия, тщательно перемешивают до равномерного увлажнения и оставляют на 15 мин. для набухания, после чего приливают 100 мл хлороформа, колбу закрывают пробкой и в течение 30 мин. встряхивают на качалке или перемешивают магнитной мешалкой. Прилипшие к стенкам колбы растительные частицы периодически погружают в раствор стеклянной палочкой с плоским концом. Полученный экстракт фильтруют через небольшой ватный фильтр в плоскодонную колбу. Первые 3-4 мл фильтрата отбрасывают. Порцию фильтрата объемом 20 мл, что соответствует 0,4 г сырья, переносят в маленькую круглодонную колбу и отгоняют растворитель досуха с вакуумом при температуре водяной бани 45-50 град. C. Эту пробу используют для проведения дифференциации: 40 мл фильтрата используют для количественного определения морфина.

Методика определения. Перед началом определения необходимо установить содержание морфина в растительном сырье. Для этого можно применять любой из известных методов: газохроматографический, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, метод полуколичественного определения морфина. С этой целью две порции хлороформного экстракта из соломы мака объемом по 10 мл (что соответствует 0,2 г сырья) помещают в круглодонные колбы и отгоняют растворитель досуха. Сухой остаток в одной колбе растворяют в 5 мл метанола (хлороформа), во второй - в 2,5 мл.

На стартовую линию пластинки размером 10 x 10 см с нейтральным слоем силикагеля наносят приготовленные растворы в количествах, указанных в табл. 1. Диаметр пятен на старте при нанесении не должен превышать 3 мм. Для каждого разведения наносят не менее двух серий пятен. После полного высыхания пятен пластинку хроматографируют в смеси растворителей толуол - ацетон - этанол - аммиак (25%) (45:45:6:2), затем высушивают под тягой в течение 30-40 мин. до полного исчезновения запаха аммиака. Пластинку опрыскивают реактивом Драгендорфа и отмечают минимальные объемы нанесенных на пластинку проб, при которых четко проявляются пятна морфина. По табл. 1 находят соответствующее содержание морфина в образце (в процентах).

 

Таблица 1

 

Содержание морфина в растительном сырье в зависимости

от объема нанесенного экстракта

 

┌─────────────────────────────────┬──────────────────────────────┐

│Количество раствора на пластинке,│Содержание морфина в сырье, % │

│              мкл                │                              │

├─────────────────────────────────┼──────────────────────────────┤

│Разведение 5 мл                  │                              │

│               2,5               │             1,00             │

│               3,0               │             0,80             │

│               3,5               │             0,70             │

│               4,0               │             0,60             │

│               4,5               │             0,55             │

│               5,0               │             0,50             │

├─────────────────────────────────┼──────────────────────────────┤

│Разведение 2,5 мл                │                              │

│               2,5               │             0,50             │

│               3,0               │             0,40             │

│               3,5               │             0,35             │

│               4,0               │             0,30             │

│               5,0               │             0,25             │

│               6,0               │             0,20             │

│               8,0               │             0,15             │

│              12,0               │             0,10             │

└─────────────────────────────────┴──────────────────────────────┘

 

Если при различном разведении пробы или разных повторностях на пластинках будут получены разные показатели содержания морфина в образце, результаты усредняют.

После получения показателей содержания морфина пробу, предназначенную для обнаружения наркотина, наркотолина и ретикулина, растворяют в различных объемах смеси метанола с хлороформом (3:1) либо в чистом хлороформе. Объем растворителя выбирается в зависимости от содержания морфина в испытуемом образце (табл. 2). Полученные растворы наносят на пластинки в количестве, указанном в той же таблице.

 

Таблица 2

 

Объем пробы, необходимой для нанесения на

хроматографическую пластину, в зависимости

от содержания морфина в растительном сырье

 

┌────────────┬───────────────────────────────────────────────────┐

│ Содержание │                       Объем                       │

│  морфина   ├───────────────────────┬───────────────────────────┤

│в образце, %│для растворения сухого │для нанесения на пластинку,│

│            │     остатка, мл       │мкл                        │

│            ├───────────┬───────────┼───────────┬───────────────┤

│            │наркотолин,│ ретикулин │наркотолин,│   ретикулин   │

│            │наркотин   │           │наркотин   │               │

├────────────┼───────────┼───────────┼───────────┼───────────────┤

│   0,1      │   1,0     │    0,5    │    8,8    │     12,0      │

│   0,15     │           │           │    5,8    │      9,0      │

├────────────┼───────────┼───────────┼───────────┼───────────────┤

│   0,20     │   2,0     │    1,0    │    8,8    │     12,0      │

│   0,25     │           │           │    7,0    │     10,0      │

│   0,30     │           │           │    5,8    │      9,0      │

├────────────┼───────────┼───────────┼───────────┼───────────────┤

│   0,35     │   4,0     │    2,0    │   10,0    │     15,0      │

│   0,40     │           │           │    8,8    │     12,0      │

│   0,45     │           │           │    7,8    │     11,0      │

│   0,50     │           │           │    7,7    │     11,0      │

├────────────┼───────────┼───────────┼───────────┼───────────────┤

│   0,55     │   6,0     │    3,0    │    9,6    │     15,0      │

│   0,60     │           │           │    8,8    │     12,0      │

│   0,65     │           │           │    8,1    │     12,0      │

│   0,70     │           │           │    7,5    │     11,0      │

│   0,75     │           │           │    7,0    │     10,5      │

│   0,80     │           │           │    6,0    │      9,0      │

└────────────┴───────────┴───────────┴───────────┴───────────────┘

 

Объем пробы и разведение выбраны с таким расчетом, чтобы наркотин проявлялся только при содержании более 20% от морфина.

Для обнаружения наркотолина и наркотина на стартовую линию хроматографической пластинки с нейтральным слоем силикагеля наносят три порции исследуемого извлечения, а также 0,01 мл раствора стандартных образцов алкалоидов, как указано на схеме (рис. 1).

 

Рис. 1. Хроматограмма экстракта маковой соломы

 

                    ┌───────┬───────┬───────┐

                    │       │       │ () () │ 6

                    │       │       │ () () │ 5

                    │ ()    │ ()    │ ()    │ 4

                    │       │       │       │

                    │       │       │ () () │ 3

                    │       │       │       │

                    │       │       │ () () │ 2

                    │       │       │       │

                    │ () () │ () () │ () () │ 1

                    ├─()────┼─()────┼─()────┤

                    │ а  б  │ в  г  │ д  е  │

                    └───────┴───────┴───────┘

 

Система толуол - ацетон - этанол - аммиак (25%) (45:45:6:2).

Пластинки многоразовые полимерные "Сорбил" или стеклянные производства различных фирм: 1 - морфин, 2 - кодеин, 3 - тебаин, 4 - наркотолин, 5 - папаверин, 6 - наркотин; а, в, д - испытуемые растворы; б, г, е - растворы стандартных образцов.

 

Пятна подсушивают в токе холодного воздуха, после чего пластинку хроматографируют восходящим способом в системе растворителей толуол - ацетон - этанол - аммиак (25%) (45:45:6:2). После прохождения фронта растворителя до конца пластинки ее сушат под тягой в течение 20 мин., закрывают стеклом зону "д-е", а оставшуюся часть опрыскивают свежеприготовленным 0,1% водным раствором прочного синего Б. Все проявленные пятна обводят карандашом и немедленно записывают их окраску. Через 15 мин. отмечают возможные изменения окраски пятен, закрывают стеклом зону "а-б", зону "д-е" открывают и опрыскивают пластинку концентрированным реактивом Драгендорфа. Все проявленные пятна обводят карандашом и фиксируют изменение окраски пятен ранее обнаруженных веществ. На хроматограммах "а" и "в" могут проявиться пятна наркотолина с величиной Rf, около 0,64. Окраска наркотолина с прочным синим Б вначале фиолетовая, а после проявления реактивом Драгендорфа - синяя. Остальные пятна на хроматограмме "в" после проявления реактивом Драгендорфа сливаются с фоном. На хроматограмме "д" небольшое пятно наркотолина располагается непосредственно под пятном папаверина. Наличие четкого пятна наркотолина позволяет отнести объект к масличному маку.

Если наркотолин в образце не найден, то отмечают присутствие наркотина. Если наркотин в пробе не обнаружен, объект относят к масличному маку.

При четком обнаружении наркотина и полном отсутствии наркотолина образец относят к опийному маку.

Обнаружение ретикулина (проводится для отнесения образца к украинским сортам мака масличного, если в этом есть необходимость).

На пластинку с нейтральным слоем сорбента наносят две порции извлечения, пятна подсушивают в токе холодного воздуха, а затем хромотографируют в системе хлороформ - изопропанол - аммиак (25%) (30:10:0,8). После окончания хроматографирования пластинку сушат в течение 30 мин., хроматограммы зоны "а-б" закрывают стеклом и опрыскивают 0,5% спиртовым раствором едкого натра, а затем 0,1% спиртовым раствором прочного синего Б. Затем стеклом закрывают хроматограммы зоны "в-г", хроматограммы зоны "а-б" открывают и опрыскивают пластинку реактивом Драгендорфа. Зона ретикулина располагается между зонами морфина и кодеина. Остальные алкалоиды выходят выше кодеина (рис. 2).

 

Рис. 2. Хроматограмма экстракта маковой соломы

 

              ┌────────────┬────────────┐

              │   ()  ()   │            │}

              │   ()  ()   │            │}

              │   ()       │            │} 4

              │   ()       │            │}

              │            │            │

              │   ()  ()   │            │  3

              │            │            │

              │   ()       │   ()       │  2

              │            │            │

              │   ()  ()   │   ()  ()   │  1

              ├───()───────┼───()───────┤

              │   а   б    │   в   г    │

              └────────────┴────────────┘

 

Система хлороформ - изопропанол - аммиак (25%) (30:10:0,8). Пластинки многоразовые, стеклянные производства различных фирм: 1 - морфин, 2 - ретикулин, 3 - кодеин, 4 - остальные алкалоиды опия; а, в - испытуемые растворы; б, г - растворы стандартных образцов.

Следует отметить, что для хроматографирования согласно вышеизложенной методике должны применяться пластины, не содержащие в качестве связующего крахмал, т.е. не темнеющие при опрыскивании реактивом Драгендорфа. Этим условиям отвечают стеклянные пластины, производимые в Эстонии, пластины Merck 60 и 25 и отечественные пластинки "Сорбфил" на стеклянной или полимерной основе.

 

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ И ФОРМИРОВАНИЕ ВЫВОДОВ

 

С целью полного расследования и правильной квалификации правонарушений, связанных с посевом и выращиванием наркотикосодержащих растений, на разрешение экспертизы ставится вопрос: к какому виду относится произраставшее на участке (указывается место изъятия) растение и является ли оно наркотикосодержащим?

Для полного ответа на вопрос в отношении растений рода мак необходимо выявить анатомо - морфологические признаки растения мак (наличие и особенности стебля, листьев, коробочек, наружную и внутреннюю эпидерму, части сосудистопроводящей системы, млечники, пыльцевые зерна и т.п.), наличие основных алкалоидов опия: морфина, кодеина и тебаина (содержание морфина и кодеина превалирует над содержанием тебаина). На этом этапе эксперт устанавливает принадлежность растений к снотворному маку. Далее необходимо оценить содержание двух алкалоидов - наркотолина и наркотина. При этом возможны три варианта:

- наличие в растительном объекте наркотолина служит достаточным основанием для вывода: представленное на исследование растение является маком масличным;

- при отсутствии на хроматограмме зоны наркотолина обращают внимание на зону наркотина: если в растительном объекте наркотин присутствует (при указанных условиях разведения), то делается вывод: представленное на исследование растение является маком опийным;

- при отсутствии на хроматограмме как зоны наркотолина, так и зоны наркотина растение также относят к маку масличному.

Наличие в растительном объекте алкалоида ретикулина является дополнительным признаком принадлежности данного растительного объекта к маку масличному.

Следует иметь в виду также, что сырье, длительно хранившееся во влажном состоянии, может резко отличаться по компонентному составу от сырья, свежесобранного или высушенного в оптимальных условиях. Поэтому растительное сырье, имеющее признаки загнивания (побурение, плесень и т.д.), использовать для проведения исследования нельзя.

Приготовление раствора стандартных образцов алкалоидов 0,05 г морфина - основания, 0,025 г кодеина - основания, 0,01 г папаверина и 0,01 г наркотина растворяют в 25 мл смеси метанола с хлороформом в соотношении 3:1.

Приготовление реактива Драгендорфа

Раствор 1: 0,85 г нитрата висмута основного растворяют в 40 мл воды и 10 мл уксусной кислоты.

Раствор 2: 20 г йодида калия растворяют в 50 мл воды. Смешивают равные объемы растворов 1 и 2. К 40 мл смеси добавляют 30 мл уксусной кислоты и 100 мл воды.