Режим работы хроматографа:

    колонка  стеклянная  длиной  150  мм  и  внутренним  диаметром  3,3 мм,

заполненная сорбентом Separon SGX С18;

    подвижная фаза - ацетонитрил/вода в соотношении 60:40;

    скорость подвижной фазы - 0,6 куб. см/мин.;

    длина волны УФ-детектора - 254 нм;

    время выхода стирола в заданных условиях - 6 мин.

    Градуировочную  характеристику  устанавливают с помощью градуировочного

коэффициента, который рассчитывают по формуле:

                                 n

                                SUM C  / S

                                i=1  i    i

                            K = -----------,

                                     n

    где:

    C  - заданная концентрация стирола в градуировочной смеси, мг куб./дм;

     i

    S   -  среднее значение трех измерений площади пика, кв. мм или единицы

     i

оптической плотности (е.о.п.);

    n - количество градуировочных смесей (n = 6).

Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.

7.5. Отбор проб

Отбор проб венозной крови в объеме 4 куб. см производят в тщательно вымытую стеклянную пробирку с притертой пробкой, в которую предварительно вносят 0,1 куб. см раствора гепарина. Срок хранения проб в холодильнике - не более 2-х суток.

8. Выполнение измерений

Проводят два параллельных измерения образца крови: 2 куб. см крови помещают в делительную воронку, в которую добавляют 40 куб. см дистиллированной воды, 0,2 куб. см 10%-го раствора щелочи NaOH и 2 куб. см гексана. Перемешивают содержимое воронки экстрактором со скоростью 2500 об./мин. в течение 45 с. После расслоения жидкостей переносят гексановый экстракт в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 1500 об./мин. Аликвотную часть экстракта в количестве 10 куб. мм вводят в колонку хроматографа и анализируют в рабочем режиме хроматографа, указанном в п. 7.4.4.

Идентификация хроматографического пика стирола проводится путем сопоставления времен удерживания хроматографических пиков в стандартном растворе стирола и в анализируемой пробе.

9. Вычисление результатов измерения

    Концентрацию стирола в крови (мг/куб. дм) вычисляют по формуле:

                        Х = S  х K,

                             i

    где:

    Х - концентрация стирола в анализируемой пробе, мг/куб. дм;

    S  - площадь пика стирола на хроматограмме, кв. мм или е.о.п.;

     i

    K - градуировочный коэффициент.

    За  результат  измерения принимают среднее арифметическое значение двух

параллельных  определений Х   , Х   ,  расхождение между которыми не должно

                           max   min

превышать значения предела повторяемости r  (табл. 2).

                                          n

                                             _

    Результат измерения представляют в виде (Х +/- ДЕЛЬТА) мг/куб. дм,

    где:

                                                   Х   + Х

    _                                          _    max   min

    Х - средний результат анализа, мг/куб. дм, Х = -----------;

                                                        2

    ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мг/куб. дм, при Р = 0,95, равная:

                                            _

                                    сигма х Х

                           ДЕЛЬТА = ---------,

                                       100

    где сигма - относительное значение характеристики погрешности, %.

10. Внутренний контроль качества результатов измерений

Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве результатов измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с нормативами, не превышающими значений, приведенных в табл. 2 и 3.

Таблица 2

ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ

ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р = 0,95

┌─────────────────────┬─────────────────────────┬─────────────────────────┐

│     Наименование    │  Предел повторяемости   │Предел внутрилабораторной│

│    определяемого    │(относительное значение  │    воспроизводимости    │

│компонента и диапазон│допускаемого расхождения │ (относительное значение │

│      измерений,     │между двумя результатами │допускаемого расхождения │

│      мг/куб. дм     │       параллельных      │между двумя результатами │

│                     │   определений), r , %   │измерений, полученными в │

│                     │                  n      │ одной лаборатории, но в │

│                     │                         │    разных условиях),    │

│                     │                         │         R  , %          │

│                     │                         │          _              │

│                     │                         │          Хl             │

├─────────────────────┼─────────────────────────┼─────────────────────────┤

│Стирол,              │          26,5           │          27,6           │

│от 0,1 до 5,0 вкл.   │                         │                         │

└─────────────────────┴─────────────────────────┴─────────────────────────┘

Таблица 3

ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ,

ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ

10.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемого соединения в градуировочных растворах, которые соответствует началу, середине и концу диапазона измерений. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданным и измеренным значением концентраций не превышает 5%.

10.2. Контроль повторяемости

    Относительное    расхождение   между   результатами   двух   измерений,

выполненных  в  соответствии  с  методикой  одним  оператором при измерении

образцов  одной  и  той  же  рабочей пробы  с использованием одних и тех же

средств  измерений  и  реактивов  в течение возможно минимального интервала

времени, не должно превышать значения предела повторяемости r  (табл. 2).

                                                             n

    Повторяемость    результатов    параллельных    определений    признают

удовлетворительной, если выполняется условие:

                                   r     Х    + Х

                                    n     max    min

                    Х    - Х    <= --- х -----------,

                     max    min    100        2

    где:

    r  - значение предела повторяемости, %;

     n

    Х   , Х    - максимальный  и  минимальный  результаты двух параллельных

     max   min

измерений содержания i-го вещества, мг/куб. дм.

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

10.3. Контроль воспроизводимости

Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

                                    R     _    _

                                     _    Х  + Х

                        _    _       Хl    1    2

                       |Х  - Х | <= --- х -------,

                         1    2     100      2

    где:

    _

    Х   -  средний  результат  анализа  рабочей  пробы  из 2-х параллельных

     1

измерений, мг/куб. дм;

    _

    Х   -  средний  результат  анализа  рабочей  пробы  из 2-х параллельных

     2

измерений, полученный в других условиях, мг/куб. дм;

    R

     _  -  значение   предела   внутрилабораторной   воспроизводимости,   %

     Хl

(табл. 2).

                                               _    _

    Расхождение  между  результатами измерений Х  и Х , полученных в разных

                                                1    2

условиях, не должно превышать значений показателя   воспроизводимости   R

                                                                         _

                                                                         Хl

при доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 2.

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

10.4. Контроль точности

    Контроль  точности  с использованием метода добавок состоит в сравнении

результата   контрольной  процедуры,  равного  разности  между  результатом

контрольного  измерения  содержания  определяемого  компонента  в  пробе, с

                      _                                     _

известной  добавкой  (Х'),  в  рабочей  пробе  без добавки (Х) и  величиной

добавки   С    (добавка  должна  составлять  не  менее  40%  от  содержания

           д

анализируемого  компонента  в  рабочей  пробе)  с  нормативом  точности  К.

Результаты   контроля   признаются  удовлетворительными,  если  выполняется

условие:

                          _    _

                         |Х' - Х - С | = K ,

                                    д     k

    где:

    _

    Х'  - средний результат контрольного измерения содержания определяемого

компонента  в  рабочей  пробе  с  известной  добавкой  из  2-х параллельных

измерений, мг/куб. дм;

    _

    Х  -  средний результат контрольного измерения содержания определяемого

компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мг/куб. дм;

    С  - величина добавки к пробе, мг/куб. дм.

     д

                            ______________________________

                           /дельта   _ 2    дельта   _  2

             K = 0,84 х   /(------ х Х)  + (------ х Х') .

                        \/   100             100

    Качество   контрольной   процедуры   признают   удовлетворительным  при

выполнении условия: K  <= K.

                     k

При превышении норматива контроля точности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

Периодичность контроля воспроизводимости и точности регламентируется в руководстве по качеству лаборатории.

Литература

1. Химическая энциклопедия/Под. ред. Н.С.Зефирова. М.: "Большая российская энциклопедия", 1995. Т. 4.

2. Лазарев Н.В. Вредные вещества в промышленности. Органические вещества: Справочник. М.: "Химия", 1976. Т. 1. С. 113-117.

Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Т.Д.Карнажицкая).