|
Номер смеси для
градуировки |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
Хлороформ, объем
исходной аттестованной |
2 |
10 |
20 |
30 |
50 |
|
Содержание
хлороформа, мкг/куб. см |
0,005 |
0,024 |
0,048 |
0,071 |
0,119 |
|
Тетрахлорметан, объем исходной аттесто- |
2 |
10 |
20 |
30 |
50 |
|
Содержание тетрахлорметана, мкг/куб. см |
0,0006 |
0,0033 |
0,006 |
0,009 |
0,015 |
|
1,2-Дихлорэтан,
объем исходной |
2 |
10 |
20 |
30 |
50 |
|
Содержание
1,2-дихлорэтана, мкг/куб. см |
0,05 |
0,25 |
0,5 |
0,75 |
1,25 |
Во флаконы из-под пенициллина помещают по
5 куб. см крови с аттестованной смесью, добавляют по 2 куб. см 10%-го раствора щавелевой кислоты, флаконы закрывают резиновой
пробкой и ставят в металлические цилиндры с просверленными в стенках
отверстиями и навинчивающейся крышкой (рис. 1 - не приводится). Первый цилиндр
с флаконом погружают в кипящую водяную баню. По истечении 5 мин. отбирают
нагретым в термостате при t = 60 град. С шприцем из
флакона 5 куб. см парогазовой пробы и вводят ее в хроматографическую
колонку через испаритель. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:
температура термостата колонок - 90 град.
С;
температура испарителя - 170 град. С;
температура детектора - 250 град. С;
расход газа-носителя (азота) - 30 куб.
см/мин.;
скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч;
время удерживания хлороформа - 3 мин. 05 с;
тетрахлорметана - 4 мин. 20 с;
1,2-дихлорэтана - 5 мин. 30 с.
На полученной хроматограмме
определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5
серий строят градуировочную характеристику.
Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.
7.5. Отбор проб
Отбор проб венозной крови в объеме не
менее 10 куб. см производится в тщательно вымытую стеклянную пробирку с
притертой пробкой, в которую предварительно добавлено 0,1 куб. см раствора
гепарина. Анализ крови проводить сразу или хранить в морозильной камере не
более 5 дней.
8. Выполнение
измерений
В два флакона из-под пенициллина помещают
по 5 куб. см крови, добавляют по 2 куб. см 10%-го
раствора щавелевой кислоты, флаконы закрывают резиновой пробкой и ставят в
металлические цилиндры с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся
крышкой (рис. 1). Первый цилиндр с флаконом погружают в кипящую водяную баню.
По истечении 5 мин. отбирают нагретым в термостате при t = 60 град. С шприцем из флакона 5 куб. см парогазовой пробы и вводят ее
в хроматографическую колонку через испаритель.
Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение
измерений двух параллельных проб крови. Условия выполнения измерений аналогичны
условиям при установлении градуировочной
характеристики (п. 7.4.).
9. Вычисление
результатов измерений
На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной
характеристике определяют концентрацию алифатических хлорированных
углеводородов в крови. За результат измерения принимают среднее
арифметическое значение двух параллельных определений X , X ,
max min
расхождение между которыми не должно превышать значения предела
повторяемости r (табл. 3).
n
Результат измерений представляют в виде:
_
(X +/- ДЕЛЬТА) мкг/куб. см,
_
где X - средний результат анализа, мкг/куб. см:
X + X
_ max min
X = -----------,
2
при условии:
r
X + X
n max min
X - X
<= --- х
-----------,
max min 100 2
где:
X - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;
max
X - минимальный результат из двух параллельных измерений;
min
r - значение предела повторяемости, %;
n
ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95, равная:
_
дельта х X
ДЕЛЬТА = ----------,
100
где дельта - относительное значение характеристики погрешности, %.
10. Внутренний
контроль качества результатов измерений
Внутренний контроль качества (ВКК)
результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная
прецизионность (воспроизводимость),
точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве
измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в
соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний
контроль качества результатов количественного химического анализа".
Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с
погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2 и 3.
Таблица 2
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
ТОЧНОСТИ,
ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
┌───────────────────┬─────────────────┬───────────────────┬───────────────┐
│ Наименование │Показатель │Показатель │ Показатель │
│ определяемого │повторяемости │воспроизводимости │ точности │
│ компонента и │(относительное │(относительное │ (границы │
│ диапазон │среднеквадрати- │среднеквадрати- │ относительной │
│ измерений, │ческое отклонение│ческое отклонение │погрешности при│
│ мкг/куб. см │повторяемости), │воспроизводимости),│ вероятности │
│ │дельта r , % │дельта , % │ Р = 0,95), │
│ │ n │ R │ +/- дельта, % │
│ │ │ _ │ │
│ │ │ Xl │ │
├───────────────────┼─────────────────┼───────────────────┼───────────────┤
│Хлороформ, от │ 15,1 │ 19,5 │ 20,7 │
│0,005 до 0,12 вкл. │ │ │ │
├───────────────────┼─────────────────┼───────────────────┼───────────────┤
│Тетрахлорметан, │ 5,3 │ 5,7 │ 17,6 │
│от 0,0006 до 0,015 │ │ │ │
│вкл. │ │ │ │
├───────────────────┼─────────────────┼───────────────────┼───────────────┤
│1,2-Дихлорэтан, │ 3,7 │ 4,5 │ 12,2 │
│от 0,05 до 1,25 │ │ │ │
│вкл. │ │ │ │
└───────────────────┴─────────────────┴───────────────────┴───────────────┘
Таблица 3
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И
ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р
= 0,95
|
Наименование |
Предел
повторяемости |
Предел внутрилабораторной вос- |
|
Хлороформ,
от |
21,87 |
26,17 |
|
1,2-Дихлорэтан,
от |
10,7 |
9,5 |
|
Тетрахлорметан, от |
7,3 |
8,7 |
10.1. Контроль
стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной
характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений.
Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных
растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного
интервала.
Градуировка признается стабильной, если
расхождение между заданными и измеренными значениями концентраций не превышает
5%.
10.2. Контроль
повторяемости
Относительное расхождение между результатами двух измерений,
выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении
образцов одной и той же рабочей пробы с использованием одних и тех же
средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала
времени, не должно превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n
Повторяемость результатов параллельных измерений признают
удовлетворительной, если:
r X + X
n
max min
X
- X <= --- х -----------,
max min 100 2
где:
r - значение предела повторяемости, %;
n
X - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;
max
X - минимальный результат из 2-х параллельных измерений.
min
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.3. Контроль воспроизводимости
Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы.
Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой,
максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное
время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и
т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных
измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:
_ _
R X + X
_ 1 2
_ _ Xl
|X - X | <= --- х -------,
1 2 100 2
где:
_
X - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
1
измерений, мкг/куб. см;
_
X - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
2
измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см;
R - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, %
_
Xl
(табл. 3).
_ _
Расхождение между результатами измерений X и X , полученных в
1 2
разных условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости
R при доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3. Если
_
Xl
условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении
отрицательного результата выясняют причины, приводящие к
неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.4. Оперативный
контроль точности
Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении
результата контрольной процедуры, равного разности между результатом
контрольного измерения содержания алифатических хлорированных соединений
(хлороформ, тетрахлорметан, 1,2-дихлорэтан) в пробе с известной добавкой
_1 _
(X ), в рабочей пробе без добавки (X) и величиной добавки С (добавка
д
должна составлять не менее 40% от содержания алифатических хлорированных
соединений в рабочей пробе) с нормативом точности К. Результаты контроля
признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
_1 _
|X - X - С | = К ,
д k
где:
_1
X - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных
измерений, мкг/куб. см;
_
X - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;
С - величина добавки к пробе, мкг/куб. см.
д
_____________________________
/ дельта _ 2 дельта _1 2
К = 0,84 / (------ х X) + (------ X ) .
\/ 100
Качество контрольной процедуры признают удовлетворительной при
выполнении условия: К <= К.
k
При превышении оперативного контроля
погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива
выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и
устраняют их.
Периодичность контроля исполнения
процедуры ВКК регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.
Литература
1. Бандман
А.Л., Войтенко Г.А., Волкова Н.В. и др. Вредные химические вещества.
Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов: Справ. изд./Под ред. В.А.Филова
и др. Л.: "Химия", 1990.
Методические указания разработаны
Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Т.В.Нурисламова, Н.А.Попова).