|
Номер смеси для
градуировки |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
Хлороформ, объем
исходной |
1,0 |
2,0 |
5,0 |
10,0 |
20,0 |
30,0 |
|
Концентрация
хлороформа, |
0,012 |
0,024 |
0,060 |
0,120 |
0,240 |
0,360 |
|
1,2-Дихлорэтан,
объем исходной |
1,0 |
2,0 |
5,0 |
10,0 |
20,0 |
30,0 |
|
Концентрация
1,2-дихлорэтана, |
0,063 |
0,126 |
0,315 |
0,630 |
1,260 |
1,880 |
|
Тетрахлорметан,
объем исходной |
0,06 |
0,2 |
0,5 |
1,0 |
1,5 |
2,0 |
|
Концентрация
тетрахлорметана, |
0,001 |
0,0033 |
0,008 |
0,016 |
0,024 |
0,033 |
|
Хлорбензол, объем
исходной |
0,2 |
0,5 |
1,0 |
2,0 |
5,0 |
10,0 |
|
Концентрация
хлорбензола, |
0,044 |
0,110 |
0,220 |
0,440 |
1,100 |
2,210 |
Для построения градуировочной
характеристики хлороформа и 1,2-дихлорэтана аттестованный раствор в объеме 100
куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид
натрия), подкисляют 10%-м раствором щавелевой кислоты (pH = 2) (контроль ведут
по лакмусовой бумаге) и приливают 10 куб. см гептана. Содержимое воронки
интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания гептановый экстракт сливают в
пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин.
Для построения градуировочной
характеристики тетрахлорметана и хлорбензола аттестованный раствор в объеме 100
куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид
натрия), подщелачивают 10%-м раствором гидроксида натрия (pH = 10) (контроль
ведут по лакмусовой бумаге) и приливают 10 куб. см гексана. Содержимое воронки
интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания гексановый экстракт сливают в
пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин.
В хроматографическую колонку через
испаритель вводят по 10 куб. мм каждого экстракта градуировочного раствора и
анализируют в условиях:
температура термостата колонок - 90 град. С;
температура испарителя - 170 град. С;
температура детектора - 250 град. С;
расход газа-носителя (азот) - 30 куб. см/мин.;
скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч;
время удерживания хлороформа - 3 мин. 05 с;
тетрахлорметана - 4 мин. 20 с;
1,2-дихлорэтана - 5 мин. 30 с;
хлорбензола - 12 мин. 25 с.
На полученной хроматограмме определяют
площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 6 серий
строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в квартал и
при смене партии реактивов.
7.5. Отбор проб
Отбор проб мочи в объеме не менее 400
куб. см производят в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой.
Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после
отбора пробы.
8. Выполнение
измерений
Для определения хлороформа и
1,2-дихлорэтана. Пробу мочи в объеме 100 куб. см помещают в делительную
воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подкисляют 10%-м
раствором щавелевой кислоты (pH = 2) (контроль ведут по лакмусовой бумаге) и
приливают 10 куб. см гептана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10
мин., после отстаивания гептановый экстракт сливают в пробирку и центрифугируют
для денатурации белка 10 мин. Полученный центрифугат в объеме 10 куб. мм
хроматографируют и проводят количественное определение анализируемых соединений
в подготовленной пробе по калибровочному графику. Процедуру повторяют
аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух
параллельных проб мочи.
Для определения тетрахлорметана и
хлорбензола. Пробу мочи в объеме 100 куб. см помещают в делительную воронку,
добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подщелачивают 10%-м раствором
гидроксида натрия (pH = 10) (контроль ведут по лакмусовой бумаге) и приливают
10 куб. см гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после
отстаивания гексановый экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для
денатурации белка 10 мин. Полученный центрифугат в объеме 10 куб. мм
хроматографируют и проводят количественное определение анализируемых соединений
в подготовленной пробе по калибровочному графику. Процедуру повторяют
аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух
параллельных проб мочи. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при
установлении градуировочной характеристики (п. 7.4.).
9. Вычисление
результатов измерений
На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной
характеристике определяют концентрацию алифатических и ароматического
хлорированных углеводородов в моче. За результат измерения принимают
среднее арифметическое значение двух параллельных определений Х , Х ,
max min
расхождение между которыми не должно превышать значения предела
повторяемости r (табл. 3). Расчет концентраций хлорированных углеводородов
n
ведут по формуле:
А х V
экст.
Х = ----------,
V х V
1 2
где:
А - количество компонента, найденное по калибровочному графику, мкг;
V - объем экстрагента, куб. см;
экст.
V - объем экстрагируемой мочи, куб. см;
1
V - объем хроматографируемой пробы, куб. см.
2
_
Результат измерений представляют в виде (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб. см,
Х + Х
_ _ max min
где Х - средний результат анализа, мкг/куб. см, Х = -----------,
2
r Х + Х
n max min
при условии: Х - Х <= ---- х -----------,
max min 100 2
где:
Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;
max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений;
min
r - значение предела повторяемости, %;
n
ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95, равная:
_
дельта х Х
ДЕЛЬТА = ----------,
100
где дельта относительное значение характеристики погрешности, %.
10. Внутренний
контроль качества результатов измерений
Внутренний контроль качества (ВКК)
результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность
(воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной
информации о качестве измерений и принятия при необходимости оперативных мер по
его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ.
Внутренний контроль качества результатов количественного химического
анализа". Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов
измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2 и 3.
Таблица 2
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
ТОЧНОСТИ,
ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
┌──────────────────┬───────────────┬────────────────────┬─────────────────┐
│ Наименование │Показатель │ Показатель │ Показатель │
│ определяемого │повторяемости │ воспроизводимости │ точности │
│ компонента и │(относительное │ (относительное │ (границы │
│ диапазон │среднеквадрати-│среднеквадратическое│ относительной │
│ измерений, │ческое │ отклонение │ погрешности при │
│ мкг/куб. см │отклонение │ воспроизводимости) │ вероятности │
│ │повторяемости),│ сигма │ Р = 0,95), │
│ │сигма , % │ R , % │ +/- дельта, % │
│ │ r │ _ │ │
│ │ │ Х │ │
│ │ │ L │ │
├──────────────────┼───────────────┼────────────────────┼─────────────────┤
│Хлороформ, от │ 3,6 │ 5,9 │ 24,9 │
│0,012 до 0,5 вкл. │ │ │ │
├──────────────────┼───────────────┼────────────────────┼─────────────────┤
│Тетрахлорметан, от│ 12,3 │ 15,9 │ 14,8 │
│0,001 до 0,03 вкл.│ │ │ │
├──────────────────┼───────────────┼────────────────────┼─────────────────┤
│1,2-Дихлорэтан, от│ 6,2 │ 7,4 │ 25,0 │
│0,06 до 1,9 вкл. │ │ │ │
├──────────────────┼───────────────┼────────────────────┼─────────────────┤
│Хлорбензол, от │ 6,7 │ 12,9 │ 16,0 │
│0,04 до 2,2 вкл. │ │ │ │
└──────────────────┴───────────────┴────────────────────┴─────────────────┘
Таблица 3
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И
ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р
= 0,95
|
Наименование |
Предел
повторяемости |
Предел
внутрилабораторной |
|
Хлороформ, |
10,1 |
13,5 |
|
Тетрахлорметан, |
14,1 |
16,3 |
|
1,2-Дихлорэтан, |
17,1 |
20,3 |
|
Хлорбензол, |
13,1 |
16,7 |
10.1. Контроль
стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной
характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений.
Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных растворах,
которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала. Градуировка
признается стабильной, если расхождение между заданными и измеренными
значениями концентраций не превышает 5%.
10.2. Контроль
повторяемости
Относительное расхождение между результатами двух измерений,
выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении
образцов одной и той же рабочей пробы с использованием одних и тех же
средств измерений и реактивов, в течение возможно минимального интервала
времени, не должно превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n
Повторяемость результатов параллельных измерений признают
удовлетворительной, если:
r Х + Х
n max min
Х - Х <= --- х -----------,
max min 100 2
где:
r - значение предела повторяемости, %;
n
Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;
max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений.
min
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.3. Контроль
воспроизводимости
Контроль воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы.
Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой,
максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное
время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и
т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают
удовлетворительной, если выполняется условие:
R
_ _ _
Х Х + Х
_ _ L 1 2
|Х - Х | <= --- х -------,
1 2 100 2
где:
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
1
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
2
измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см;
R - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, %
_
Х
L
(табл. 3).
_ _
Расхождение между результатами измерений Х и Х , полученных в разных
1 2
условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости R при
_
Х
L
доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.4. Контроль
точности
Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении
результата контрольной процедуры, равного разности между результатом
контрольного измерения содержания хлорированных соединений (хлороформ,
тетрахлорметан, 1,2-дихлорэтан, хлорбензол) в пробе с известной добавкой
1
_ _
(Х ), в рабочей пробе без добавки (Х) и величиной добавки С (добавка
д
должна составлять не менее 40% от содержания хлорированных соединений в
рабочей пробе) с нормативом точности К. Результаты контроля признаются
удовлетворительными, если выполняется условие:
1
_ _
|Х - Х - С | = К ,
д k
1
_
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;
С - величина добавки к пробе, мкг/куб. см.
д
____________________________
/ 2 1 2
/дельта _ дельта _
К = 0,84 х /(------ х Х) + (------ х Х )
\/ 100 100
Качество контрольной процедуры признают удовлетворительным при
выполнении условия: К <= К.
k
При превышении норматива контроля К эксперимент повторяют. При повторном превышении
указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным
результатам контроля, и устраняют их.
Периодичность ВКК регламентируют в
руководстве по качеству лаборатории.
Литература
1. Бандман А.Л., Войтенко Г.А., Волкова
Н.В. и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галогенпроизводные
углеводородов: Справ. изд.
/Под ред. В.А.Филова и др. Л.: "Химия", 1990.
Методические указания разработаны
Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии
(Т.С.Уланова, Т.В.Нурисламова, Н.А.Попова).