|
Номер
раствора |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
Объем раствора А, куб. мм
|
0,6 |
1,2 |
2,5 |
4,5 |
6,5 |
|
Массовая
концентрация формальдегида, |
0,001 |
0,002 |
0,004 |
0,007 |
0,010 |
|
Массовая
концентрация ацетальдегида, |
0,001 |
0,002 |
0,004 |
0,007 |
0,010 |
|
Массовая
концентрация пропионового |
0,001 |
0,002 |
0,004 |
0,007 |
0,010 |
|
Массовая
концентрация масляного |
0,001 |
0,002 |
0,004 |
0,007 |
0,010 |
|
Объем раствора В, куб. мм |
2,5 |
5,0 |
10,0 |
17,5 |
25,0 |
|
Массовая
концентрация ацетона, |
0,01 |
0,02 |
0,04 |
0,07 |
0,10 |
Таблица 2
РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ
ХАРАКТЕРИСТИКИ
ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В КРОВИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ
КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,01 - 0,10 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА
В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,1 - 2,0 МКГ/КУБ. СМ
|
Номер
раствора |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
Объем раствора А, куб. мм
|
6,0 |
12,5 |
25,0 |
44,0 |
63,0 |
|
Массовая
концентрация формальдегида, |
0,01 |
0,02 |
0,04 |
0,07 |
0,10 |
|
Массовая
концентрация ацетальдегида, |
0,01 |
0,02 |
0,04 |
0,07 |
0,10 |
|
Массовая
концентрация пропионового |
0,01 |
0,02 |
0,04 |
0,07 |
0,10 |
|
Массовая
концентрация масляного |
0,01 |
0,02 |
0,04 |
0,07 |
0,10 |
|
Объем раствора В, куб. мм |
25,0 |
125,0 |
250,0 |
375 |
500 |
|
Массовая
концентрация ацетона, |
0,10 |
0,5 |
1,0 |
1,48 |
1,98 |
В делительную
воронку помещают 2,0 куб. см градуировочного
раствора, разводят дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют 2,0
куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина в
2 М хлористоводородной кислоте, 2 капли концентрированной хлористоводородной
кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин.
После расслоения жидкостей верхний слой (гексановый)
переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся
крышкой и центрифугируют 20 мин. со
скоростью 1500 об./мин.,
затем 2 куб. см гексана переносят в бюксу и
высушивают в потоке воздуха. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см
элюента и анализируют аликвотную часть (10 куб. мм) в условиях:
элюент - (ацетонитрил:вода = 60:40) + 2,5% уксусной кислоты + 1%
диэтиламина
колонка 80 х 2 мм, заполнена Диасорбом С16;
скорость движения элюента 100 куб. мм/мин.;
длина волны УФ-детектора 358 нм;
время удерживания:
2,4-динитрофенилгидразона формальдегида 3,10 мин.;
2,4-динитрофенилгидразона ацетальдегида 3,95 мин.;
2,4-динитрофенилгидразона ацетона 4,70 мин.;
2,4-динитрофенилгидразона пропионового альдегида 5,04 мин.;
2,4-динитрофенилгидразона масляного альдегида 7,95 мин.
Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:
n
SUM С / S
i=1 i i
К = -----------,
n
где:
С - концентрация вещества в градуировочной смеси, мкг/куб. см;
i
S - среднее значение пяти измерений площади пика i-й концентрации,
i
единицы оптической плотности (е.о.п.);
n - количество градуировочных смесей (n = 5).
7.6. Отбор проб
Отбор проб венозной крови в объеме не
менее 4 куб. см проводят в чистую пробирку с притертой пробкой, в которую
предварительно добавлено 0,1 куб. см раствора гепарина. Срок хранения пробы в
холодильнике - 2 дня.
8. Выполнение
измерений
Выполняют два параллельных измерения
образца крови. В делительную воронку помещают 2,0 куб. см
крови, разбавляют дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют по 2,0
куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина в
2 М хлористоводородной кислоте, 2 капли концентрированной хлористоводородной
кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин.
После отстаивания верхний слой (гексановый) переносят
в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и
центрифугируют 20 мин. со скоростью 1500 об./мин. После расслоения жидкостей 2 куб. см гексанового экстракта переносят в бюксу и высушивают в
потоке воздуха. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента, вводят в
хроматограф аликвотную часть (10 куб. мм) и анализируют в условиях, указанных в
п. 7.5.
Идентификацию хроматографических
пиков 2,4-динитрофенилгидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового и масляного альдегидов и ацетона проводят
путем сравнения времен удерживания хроматографических
пиков в анализируемой пробе и в растворах 2,4-динитрофенилгидразонов альдегидов
и ацетона, полученных согласно п. 7.3.6..
9. Вычисление
результатов измерения
Концентрацию альдегидов и ацетона в крови
(мкг/куб. см) вычисляют по формуле:
Х = S х К,
i
где:
Х - концентрация вещества в анализируемой пробе, мкг/куб. см;
S - площадь пика соответствующего 2,4-динитрофенилгидразона альдегида
i
(или ацетона) на хроматограмме, е.о.п.;
К - градуировочный коэффициент.
_
За результат измерения Х принимают среднее арифметическое значение двух
параллельных измерений Х , Х , расхождение между которыми не должно
1 2
превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n
_
Результат измерения представляют в виде (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб. см,
где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95, равная:
_
дельта х Х
ДЕЛЬТА = ----------,
100
где дельта - относительное значение характеристики погрешности, %.
10. Внутренний
контроль качества результатов измерений
Внутренний контроль качества (ВКК)
результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная
прецизионность (воспроизводимость),
точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве
результатов измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его
повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ.
Внутренний контроль качества результатов количественного химического
анализа".
Методика выполнения измерений
обеспечивает получение результатов измерений с нормативами, не превышающими
значений, приведенных в табл. 3 и 4.
Таблица 3
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И
ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р
= 0,95
┌──────────────────────┬─────────────────────┬────────────────────────────┐
│ Наименование │Предел повторяемости │ Предел внутрилабораторной │
│ определяемого │ (относительное │ воспроизводимости │
│ компонента и │значение допускаемого│ (относительное значение │
│ диапазон измерений, │ расхождения между │ допускаемого расхождения │
│ мкг/куб. см │ двумя результатами │ между двумя результатами │
│ │ параллельных │ измерений, полученными в │
│ │ определений), r , % │ одной лаборатории, но в │
│ │ n │ разных условиях), R_ , % │
│ │ │ Хl │
├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤
│Формальдегид, │ 26,9 │ 28,1 │
│от 0,001 до 0,100 вкл.│ │ │
├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤
│Ацетальдегид, │ 21,2 │ 24,8 │
│от 0,001 до 0,100 вкл.│ │ │
├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤
│Пропионовый альдегид, │ 25,5 │ 27,4 │
│от 0,001 до 0,100 вкл.│ │ │
├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤
│Масляный альдегид, │ 25,1 │ 26,2 │
│от 0,001 до 0,100 вкл.│ │ │
├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤
│Ацетон, │ 25,6 │ 28,3 │
│от 0,01 до 2,000 вкл. │ │ │
└──────────────────────┴─────────────────────┴────────────────────────────┘
Таблица 4
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
ТОЧНОСТИ,
ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
┌─────────────┬─────────────────┬──────────────────┬──────────────────────┐
│Наименование │Показатель повто-│Показатель воспро-│ Показатель точности │
│определяемого│ряемости (относи-│изводимости (отно-│(границы относительной│
│компонента и │тельное средне- │сительное средне- │ погрешности при │
│ диапазон │квадратическое │квадратическое │вероятности Р = 0,95),│
│ измерений, │отклонение │отклонение воспро-│ +/- дельта, % │
│ мг/куб. дм │повторяемости), │изводимости), │ │
│(мкг/куб. см)│сигма , % │сигма , % │ │
│ │ r │ R │ │
├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤
│Формальдегид,│ 11,9 │ 12,7 │ 26,5 │
│от 0,001 │ │ │ │
│до 2,000 вкл.│ │ │ │
├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤
│Ацетальдегид,│ 7,7 │ 10,2 │ 14,2 │
│от 0,001 │ │ │ │
│до 0,100 вкл.│ │ │ │
├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤
│Пропионовый │ 11,3 │ 13,5 │ 24,3 │
│альдегид, │ │ │ │
│от 0,001 │ │ │ │
│до 0,100 вкл.│ │ │ │
├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤
│Масляный │ 10,8 │ 12,7 │ 23,8 │
│альдегид, │ │ │ │
│от 0,001 │ │ │ │
│до 0,100 вкл.│ │ │ │
├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤
│Ацетон, │ 8,1 │ 10,4 │ 21,7 │
│от 0,01 │ │ │ │
│до 2,00 вкл. │ │ │ │
└─────────────┴─────────────────┴──────────────────┴──────────────────────┘
10.1. Контроль
стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной
характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений.
Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных
растворах, которые соответствуют началу, середине и концу диапазона измерений.
Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и
измеренными значениями концентраций не превышает 5%.
10.2. Контроль
повторяемости
Относительное расхождение между результатами двух измерений,
выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении
образцов одной и той же рабочей пробы с использованием одних и тех же
средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала
времени, не должно превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n
Повторяемость результатов параллельных
определений признают удовлетворительной, если выполняется условие:
r Х + Х
n max min
Х - Х <= --- х -----------,
max min 100 2
где:
r - значение предела повторяемости, %;
n
Х , Х - максимальный и минимальный результаты двух параллельных
max min
измерений содержания i-го вещества, мкг/куб. см.
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.3. Контроль воспроизводимости
Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы.
Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой,
максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное
время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и
т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных
измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:
R_ Х + Х
_ _ Хl 1 2
|Х - Х | <= --- х -------,
1 2 100 2
где:
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
1
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
2
измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см;
R_ - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, %
Хl
(табл. 3).
_ _
Расхождение между результатами измерений Х и Х , полученных в разных
1 2
условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости R_ при
Хl
доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.4. Контроль
точности
Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении
результата контрольной процедуры, равного разности между результатом
контрольного измерения содержания определяемого компонента в пробе с
_ _
известной добавкой (Х'), в рабочей пробе без добавки (Х) и величиной
добавки С (добавка должна составлять не менее 40% от содержания
д
анализируемого компонента в рабочей пробе) с нормативом точности К.
Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется
условие:
_ _
|Х' - Х - С | = К ,
д k
где:
_
Х' - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;
С - величина добавки к пробе, мкг/куб. см.
д
______________________________
/дельта _ 2 дельта _ 2
К = 0,84 х /(------ х Х) + (------ х Х') .
\/ 100 100
Качество контрольной процедуры признают удовлетворительным при
выполнении условия: К <= К.
k
При превышении оперативного контроля
погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного
норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам
контроля, устраняют их.
Периодичность контроля воспроизводимости и точности регламентируется в руководстве
по качеству лаборатории.
Литература
1. Химическая энциклопедия/Под. ред. И.Л.Кнунянц.
М.: "Советская энциклопедия", 1988. Т. 1.
2. Химическая энциклопедия/Под. ред. И.Л.Кнунянц.
М.: "Советская энциклопедия", 1990. Т. 2.
3. Филов В.А., Тиунов Л.А. Вредные
химические вещества. Галоген- и кислородсодержащие
органические соединения: Справочник. С.-Пб.: "Химия",
1994.
4. Химическая энциклопедия/Под. ред. Н.С.Зефирова.
М.: "Большая российская энциклопедия", 1995. Т. 4.
5. Химическая энциклопедия/Под. ред. Н.С.Зефирова.
М.: "Большая российская энциклопедия", 1999. Т. 5.
Методические указания разработаны
Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Т.Д.Карнажицкая, Г.И.Леготкина).