Оставьте ссылку на эту страницу в соцсетях:

Поиск по базе документов:

 

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной

службы по надзору в сфере

защиты прав потребителей

и благополучия человека,

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

9 августа 2006 года

 

Дата введения:

1 сентября 2006 года

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ ФОРМАЛЬДЕГИДА,

АЦЕТАЛЬДЕГИДА, ПРОПИОНОВОГО АЛЬДЕГИДА, МАСЛЯНОГО АЛЬДЕГИДА

И АЦЕТОНА В ПРОБАХ КРОВИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ

ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.1.2111-06

 

1. Область применения

 

Методические указания по определению концентрации алифатических альдегидов и ацетона в крови предназначены для использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.

Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием альдегидов и ацетона в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 "ГСОЕИ. Методики выполнения измерений", ГОСТ Р 1.5-92 "ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов".

Методика выполнения измерений обеспечивает определение альдегидов в крови в диапазоне концентраций 0,001-0,100 мкг/куб. см, ацетона - 0,01-2,00 мкг/куб. см с погрешностью, не превышающей 26,5%, - для формальдегида, 14,2% - для ацетальдегида, 21,7% - для ацетона, 24,3% - для пропионового альдегида, 23,8% - для масляного альдегида, при доверительной вероятности Р = 0,95.

 

    Формальдегид (HCHO)                           Молекулярная масса 30,03.

 

Формальдегид (муравьиный альдегид, метаналь) - бесцветный газ с резким раздражающим запахом. Температура кипения: -19,2 град. С, плотность: 0,8153 г/куб. см. Хорошо растворим в воде, спиртах и других полярных растворителях. При низких температурах смешивается с неполярными растворителями (толуолом, диэтиловым эфиром, этилацетатом) [5]. Обладает раздражающим, сенсибилизирующим и кожно-резорбтивным действием, оказывает гепатотропный эффект, относится к веществам, обусловливающим канцерогенную опасность [3].

 

    Ацетальдегид (CH3CHO)                         Молекулярная масса 44,05.

 

Ацетальдегид (уксусный альдегид) - бесцветная жидкость с удушающим запахом. Температура кипения: 20,16 град. С, плотность: 0,778 г/куб. см. Смешивается во всех соотношениях с водой и большинством органических растворителей [1]. Оказывает наркотическое, раздражающее, мутагенное и канцерогенное действие [3].

 

    Пропионовый альдегид (CH3CH2CHO)              Молекулярная масса 58,08.

 

Пропионовый альдегид (пропаналь) - бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 48,8 град. С, плотность: 0,8058 г/куб. см. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями [4]. Оказывает наркотическое действие, вызывает изменения со стороны дыхательной системы, паренхиматозных органов, угнетает гемопоэз [3].

 

    Масляный альдегид (CH3(CH2)2CHO)              Молекулярная масса 72,11.

 

Масляный альдегид (бутаналь) - бесцветная прозрачная жидкость с резким запахом. Температура кипения: 75,7 град. С, плотность: 0,817 г/куб. см [2]. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями. Оказывает наркотическое, раздражающее и кожно-резорбтивное действие [3].

 

    Ацетон (CH3COCH3)                             Молекулярная масса 58,08.

 

Ацетон (диметилкетон) - летучая бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 56,1 град. С, плотность: 0,792 г/куб. см [1]. Смешивается с водой и органическими растворителями (эфиром, хлороформом, бензолом, четыреххлористым углеродом). Обладает наркотическим и кожно-резорбтивным действием, угнетает репродуктивную функцию. Преимущественно действует на центральную нервную систему [3].

 

2. Сущность метода

 

Методика основана на предварительном переводе альдегидов и ацетона в производные 2,4-динитрофенилгидразина, концентрировании продуктов дериватизации из биологического материала экстракцией гексаном, высушивании гексанового экстракта, растворении высушенного остатка в ацетонитриле и анализе на жидкостном хроматографе.

Измерение концентрации альдегидов и ацетона выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием УФ-детектора.

Измерению не мешают спирты, органические кислоты, кетоны и другие альдегиды.

 

3. Средства измерений, вспомогательные устройства,

материалы, растворы и реактивы

 

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы:

 

3.1. Средства измерений

 

Жидкостный хроматограф "Милихром-4" с

ультрафиолетовым детектором

Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические                     ГОСТ 24104-01

Гири Г2-210                                                 ГОСТ 7328-01

Термометр стеклянный                                        ГОСТ 28498-90

Микрошприцы МШ-10                                           ТУ 2.833.106-00

Цилиндр мерный вместимостью 50 куб. см                      ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5 куб. см         ГОСТ 29227-91

Колбы мерные вместимостью 5, 100, 200, 500                  ГОСТ 1770-74

и 1000 куб. см

Редуктор кислородный                                        ТУ 26-05-236-73

Стандартные образцы:

Формальдегид в воде с концентрацией 1,0 мг/куб. см          ГСО 7347-96.

 

3.2. Вспомогательные устройства

 

Колонка металлическая длиной 8 см и

внутренним диаметром 2 мм, заполненная

сорбентом Диасорб С16 зернением 5-6-7 мкм

Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-"Элекон"                    ТУ 9443-001-245.23530-97

Дистиллятор                                        ТУ 61-1-721-79

Сушильный шкаф ШСС-80 П УХЛ 4.2                    ТУ 16.531.743-83

Дефлегматор длиной 300 мм                          ГОСТ 25336-82

Холодильник шариковый ХШ-300 (6 шар.)              ГОСТ 1770-74

Холодильник прямой ХПТ-3-300                       ГОСТ 1770-74

Воронка Шотта (пор 16)                             ГОСТ 25336-82

Воронки делительные вместимостью 250 куб. см       ГОСТ 23932-90

Бюксы СВ 19/9                                      ТУ 92-891.029-91

Пробирки центрифужные пропиленовые с

завинчивающейся крышкой вместимостью

15 куб. см, пр-во "Sarstedt" (Германия)

Колбы для перегонки круглодонные                   ГОСТ 8682-93

вместимостью 1,0; 2,0 куб. дм

Стакан термостойкий вместимостью 2 куб. дм         ГОСТ 23932-90.

 

3.3. Реактивы

 

Гексан для хроматографии, осч                       ТУ 6-09-4521-77

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, осч       ТУ 6-09-14-2167-84

Вода дистиллированная                               ГОСТ 6709-72

Ацетальдегид, чда                                   ТУ 6-09-3844-74

Пропионовый альдегид, чда                           ТУ 6-09-08-1637-83

Масляный альдегид, чда                              ТУ 6-09-08-1885-86

Ацетон, осч (чистота не менее 99,75)                ТУ 2633-039-44493179-00

2,4-Динитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ), ч              ТУ 6-09-2394-77

2,4-Динитрофенилгидразон формальдегида,

перекристаллизованный из очищенного

этанола, чистота не менее 99,0%

2,4-Динитрофенилгидразон ацетальдегида,

перекристаллизованный из очищенного

этанола, чистота не менее 99,0%

2,4-Динитрофенилгидразон пропионового

альдегида, перекристаллизованный из

очищенного этанола, чистота не менее 99,0%

2,4-Динитрофенилгидразон масляного альдегида,

перекристаллизованный из очищенного

этанола, чистота не менее 99,0%

2,4-Динитрофенилгидразон ацетона,

перекристаллизованный из очищенного

этанола, чистота не менее 99,0%

Кислота хлористоводородная (плотность 1,19), хч     ГОСТ 3118-77

Перманганат калия, ч                                ГОСТ 20490-75

Спирт этиловый, очищенный от альдегидов и           ГОСТ Р 51652-00

кетонов кипячением с 2,4-динитрофенилгидразином,

перегнанный

Калий двухромовокислый, чда                         ГОСТ 4220-75

Серная кислота                                      ГОСТ 4204-77

Кислота уксусная, хч                                ГОСТ 61-75

Диэтиламин, ч, перегнанный для хроматографии        ТУ 6-09-68-89

Раствор гепарина в ампулах

(5000 ед. в 1 куб. см).

 

3.4. Материалы

 

Гелий газообразный                                            ТУ 51-940-80.

 

3.5. Растворы

 

Хромовая смесь

Элюент для хроматографии

2 М водный раствор хлористоводородной кислоты

0,2%-й раствор 2,4-динитрофенилгидразина

в 2 М хлористоводородной кислоте

Исходный раствор альдегидов для калибровки

Исходный раствор ацетона для калибровки.

Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования, химреактивов и материалов, по метрологическим и техническим характеристикам не уступающих перечисленным.

 

4. Требования к безопасности

 

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности по ГОСТ 12.1.007-88 и 12.1.005-88.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79, противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и меры безопасности, указанные в "Руководстве по правилам эксплуатации прибора".

 

5. Требования к квалификации оператора

 

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

 

6. Условия измерений

 

6.1. При подготовке проб к анализу и приготовлении растворов соблюдают следующие условия:

- температура воздуха 15-25 град. С;

- атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха не более 80% при температуре 25 град. С.

6.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.

 

7. Подготовка к выполнению измерений

 

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды и растворителей, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

 

7.1. Подготовка посуды

 

Используемую посуду замочить на 1 ч в хромовой смеси, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой и просушить при температуре 120 град. С.

 

7.2. Подготовка растворителей

 

7.2.1. Очистка ацетонитрила от примесей. В колбу вместимостью 2 куб. дм помещают 1 куб. дм ацетонитрила и 20 г KMnO4, кипятят с шариковым холодильником в течение 1 ч, затем перегоняют с дефлегматором при температуре 81,6 град. С, отбирая фракции по 200 куб. см. Когда в колбе останется около 200 куб. см продукта, перегонку прекращают. Остаток можно смешивать с новой порцией растворителя. Первую фракцию (200 куб. см) отбрасывают, а остальные проверяют на поглощение в УФ-области (оптическая плотность при 200 нм не должна превышать 0,05 о.е./см).

7.2.2. Очистка диэтиламина от примесей. В колбу вместимостью 1,0 куб. дм помещают 0,5 куб. дм диэтиламина и перегоняют с прямым холодильником. Первые и последние порции (50 куб. см) отбрасывают, оставляют среднюю порцию. Перегнанный раствор должен быть бесцветным.

7.2.3. Очистка этилового спирта от альдегидов и кетонов. К 1 куб. дм 96%-го спирта добавляют 2 г 2,4-динитрофенилгидразина, 0,5 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты и кипятят с шариковым холодильником 1 ч. Перегоняют с дефлегматором в приборе со стеклянными шлифами, отбрасывая первые и последние 100 куб. см, после этого отгоняют вторично.

 

7.3. Приготовление растворов

 

7.3.1. Хромовая смесь. В термостойкий стакан вместимостью 2 куб. дм насыпают 50 г хромовокислого калия, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 куб. дм концентрированной серной кислоты.

7.3.2. Элюент для хроматографии. 60 куб. см ацетонитрила смешивают с 40 куб. см дистиллированной воды. Подвижную фазу фильтруют через воронку Шотта (пор 16) и дегазируют барботированием гелия в течение 5 мин. со скоростью 50 - 60 куб. см/мин. Затем добавляют 2,5% уксусной кислоты и 1% диэтиламина (объемных %).

7.3.3. Хлористоводородная кислота, 2 моль/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 1 куб. дм, наполненную до половины объема дистиллированной водой, прибавляют 61,0 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты (плотность 1,19 г/куб. см), доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

7.3.4. 2,4-Динитрофенилгидразин, 0,2%-й раствор в 2 М хлористоводородной кислоте. В мерную колбу на 100 куб. см вносят 0,2 г 2,4-динитрофенилгидразина и доводят до метки 2 М раствором хлористоводородной кислоты.

7.3.5. Исходный раствор альдегидов для калибровки (раствор А). В мерную колбу объемом 500 куб. см, содержащую дистиллированную воду, в которую предварительно добавляют 5 куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина, переносят 4 куб. см ГСО формальдегида с концентрацией 1,0 мг/куб. см (4,0 мг), 5,0 куб. мм (3,9 мг) ацетальдегида, 5,0 куб. мм (4,03 мг) пропионового альдегида, 5,0 куб. мм (4,08 мг) масляного альдегида и доводят водой до метки. Стандартные растворы готовят с предварительным охлаждением альдегидов и дистиллированной воды. Срок хранения - 8 ч. Содержание альдегидов в растворе А составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): формальдегида - 8,0 мкг/куб. см; ацетальдегида - 7,8 мкг/куб. см; пропионового альдегида - 8,1 мкг/куб. см; масляного альдегида - 8,2 мкг/куб. см.

Исходный раствор ацетона для калибровки (раствор В). В мерную колбу объемом 200 куб. см, содержащую дистиллированную воду, в которую предварительно добавляют 5 куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина, переносят 5,0 куб. мм (3,96 мг) ацетона и доводят водой до метки. Срок хранения раствора - 8 ч. Содержание ацетона в растворе В составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества) 19,8 мкг/куб. см.

7.3.6. Получение 2,4-динитрофенилгидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового и масляного альдегидов и ацетона (используются для идентификации гидразонов альдегидов и ацетона в анализируемых пробах). Эквимолярные количества 2,4-ДНФГ и анализируемого вещества кипятят в очищенном от альдегидов и кетонов этаноле в течение 1 ч в присутствии каталитических количеств хлористоводородной кислоты. Выпавший в осадок 2,4-динитрофенилгидразон соответствующего альдегида (ацетона) отфильтровывают и перекристаллизовывают из этанола до постоянной температуры плавления.

 

7.4. Подготовка хроматографической колонки

 

Колонку устанавливают на хроматограф и подают элюирующую жидкость, подготовленную в соответствии с п. 7.3.2., со скоростью 100 куб. мм/мин. до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора.

 

7.5. Установление градуировочной характеристики

 

7.5.1. Строят две зависимости площади хроматографического пика от концентрации альдегидов и ацетона в крови в диапазонах 0,001-0,010 мкг/куб. см и 0,01-0,10 мкг/куб. см - для альдегидов, 0,01-0,10 мкг/куб. см и 0,1-2,0 мкг/куб. см - для ацетона. Градуировочные характеристики устанавливают по пяти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из пяти растворов, готовят из растворов А и В.

7.5.2. Для приготовления градуировочных смесей отбирается проба крови объемом не менее 60 куб. см. В соответствии с п. 8 проводят анализ пробы крови на содержание альдегидов и ацетона. При наличии анализируемых веществ в холостой пробе вычитают их фоновое содержание при построении калибровки.

7.5.3. Градуировочные растворы готовят в мерных колбах объемом 5 куб. см. Для этого в каждую колбу вносят растворы А и В в соответствии с табл. 1 и 2, прибавляют 0,05 куб. см раствора гепарина, доводят объем до метки цельной кровью и перемешивают. Анализируют свежеприготовленные растворы.

 

Таблица 1

 

РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ

ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В КРОВИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ

КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,001 - 0,010 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА

В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,01 - 0,10 МКГ/КУБ. СМ

 

Номер раствора            

1 

2 

3  

4  

5  

Объем раствора А, куб. мм              

0,6 

1,2 

2,5 

4,5 

6,5 

Массовая концентрация формальдегида,   
мкг/куб. см                            

0,001

0,002

0,004

0,007

0,010

Массовая концентрация ацетальдегида,   
мкг/куб. см                            

0,001

0,002

0,004

0,007

0,010

Массовая концентрация пропионового     
альдегида, мкг/куб. см                 

0,001

0,002

0,004

0,007

0,010

Массовая концентрация масляного        
альдегида, мкг/куб. см                 

0,001

0,002

0,004

0,007

0,010

Объем раствора В, куб. мм               

2,5 

5,0 

10,0 

17,5 

25,0 

Массовая концентрация ацетона,         
мкг/куб. см                            

0,01

0,02

0,04

0,07

0,10

 

Таблица 2

 

РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ

ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В КРОВИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ

КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,01 - 0,10 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА

В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,1 - 2,0 МКГ/КУБ. СМ

 

Номер раствора            

1  

2  

3  

4 

5  

Объем раствора А, куб. мм             

6,0 

12,5

25,0

44,0

63,0

Массовая концентрация формальдегида,  
мкг/куб. см                           

0,01

0,02

0,04

0,07

0,10

Массовая концентрация ацетальдегида,  
мкг/куб. см                           

0,01

0,02

0,04

0,07

0,10

Массовая концентрация пропионового    
альдегида, мкг/куб. см                

0,01

0,02

0,04

0,07

0,10

Массовая концентрация масляного       
альдегида, мкг/куб. см                

0,01

0,02

0,04

0,07

0,10

Объем раствора В, куб. мм              

25,0

125,0

250,0

375

500 

Массовая концентрация ацетона,        
мкг/куб. см                           

0,10

0,5 

1,0 

1,48

1,98

 

В делительную воронку помещают 2,0 куб. см градуировочного раствора, разводят дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют 2,0 куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М хлористоводородной кислоте, 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин. После расслоения жидкостей верхний слой (гексановый) переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 20 мин. со скоростью 1500 об./мин., затем 2 куб. см гексана переносят в бюксу и высушивают в потоке воздуха. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента и анализируют аликвотную часть (10 куб. мм) в условиях:

    элюент  -  (ацетонитрилода  =  60:40)  +  2,5%  уксусной кислоты + 1%

диэтиламина

    колонка 80 х 2 мм, заполнена Диасорбом С16;

    скорость движения элюента                             100 куб. мм/мин.;

    длина волны УФ-детектора                              358 нм;

    время удерживания:

    2,4-динитрофенилгидразона формальдегида               3,10 мин.;

    2,4-динитрофенилгидразона ацетальдегида               3,95 мин.;

    2,4-динитрофенилгидразона ацетона                     4,70 мин.;

    2,4-динитрофенилгидразона пропионового альдегида      5,04 мин.;

    2,4-динитрофенилгидразона масляного альдегида         7,95 мин.

Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:

 

                                   n

                                  SUM С  / S

                                  i=1  i    i

                              К = -----------,

                                       n

 

    где:

    С  - концентрация вещества в градуировочной смеси, мкг/куб. см;

     i

    S   -  среднее  значение  пяти измерений площади пика i-й концентрации,

     i

единицы оптической плотности (е.о.п.);

    n - количество градуировочных смесей (n = 5).

 

7.6. Отбор проб

 

Отбор проб венозной крови в объеме не менее 4 куб. см проводят в чистую пробирку с притертой пробкой, в которую предварительно добавлено 0,1 куб. см раствора гепарина. Срок хранения пробы в холодильнике - 2 дня.

 

8. Выполнение измерений

 

Выполняют два параллельных измерения образца крови. В делительную воронку помещают 2,0 куб. см крови, разбавляют дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют по 2,0 куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М хлористоводородной кислоте, 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин. После отстаивания верхний слой (гексановый) переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 20 мин. со скоростью 1500 об./мин. После расслоения жидкостей 2 куб. см гексанового экстракта переносят в бюксу и высушивают в потоке воздуха. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента, вводят в хроматограф аликвотную часть (10 куб. мм) и анализируют в условиях, указанных в п. 7.5.

Идентификацию хроматографических пиков 2,4-динитрофенилгидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового и масляного альдегидов и ацетона проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и в растворах 2,4-динитрофенилгидразонов альдегидов и ацетона, полученных согласно п. 7.3.6..

 

9. Вычисление результатов измерения

 

Концентрацию альдегидов и ацетона в крови (мкг/куб. см) вычисляют по формуле:

 

                                Х  = S  х К,

                                      i

 

    где:

    Х - концентрация вещества в анализируемой пробе, мкг/куб. см;

    S  -  площадь пика соответствующего 2,4-динитрофенилгидразона альдегида

     i

(или ацетона) на хроматограмме, е.о.п.;

    К - градуировочный коэффициент.

                           _

    За результат измерения Х принимают среднее арифметическое значение двух

параллельных   измерений  Х , Х ,  расхождение  между  которыми  не  должно

                           1   2

превышать значения предела повторяемости r  (табл. 3).

                                          n

                                                _

    Результат  измерения  представляют  в виде (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб. см,

где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95, равная:

 

                                            _

                                   дельта х Х

                          ДЕЛЬТА = ----------,

                                      100

 

    где дельта - относительное значение характеристики погрешности, %.

 

10. Внутренний контроль качества результатов измерений

 

Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве результатов измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с нормативами, не превышающими значений, приведенных в табл. 3 и 4.

 

Таблица 3

 

ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ

ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р = 0,95

 

┌──────────────────────┬─────────────────────┬────────────────────────────┐

     Наименование     │Предел повторяемости │ Предел внутрилабораторной 

    определяемого        (относительное         воспроизводимости     

     компонента и     │значение допускаемого│  (относительное значение  

│ диапазон измерений,    расхождения между    допускаемого расхождения 

     мкг/куб. см      │ двумя результатами    между двумя результатами 

                          параллельных       измерений, полученными в 

                      │ определений), r , % │  одной лаборатории, но в  

                                      n      разных условиях), R_ , % 

                                                                Хl    

├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤

│Формальдегид,                  26,9                    28,1           

│от 0,001 до 0,100 вкл.│                                                

├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤

│Ацетальдегид,                  21,2                    24,8           

│от 0,001 до 0,100 вкл.│                                                

├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤

Пропионовый альдегид, │         25,5                    27,4           

│от 0,001 до 0,100 вкл.│                                                

├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤

│Масляный альдегид,             25,1                    26,2           

│от 0,001 до 0,100 вкл.│                                                

├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤

│Ацетон,                        25,6                    28,3           

│от 0,01 до 2,000 вкл. │                                                

└──────────────────────┴─────────────────────┴────────────────────────────┘

 

Таблица 4

 

ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ,

ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ

 

┌─────────────┬─────────────────┬──────────────────┬──────────────────────┐

│Наименование │Показатель повто-│Показатель воспро-│ Показатель точности 

определяемого│ряемости (относи-изводимости (отно-│(границы относительной│

│компонента и │тельное средне-  сительное средне- │   погрешности при   

  диапазон   квадратическое   квадратическое    │вероятности Р = 0,95),│

│ измерений,  │отклонение       отклонение воспро-│    +/- дельта, %    

│ мг/куб. дм  │повторяемости),  изводимости),                          

│(мкг/куб. см)│сигма , %        │сигма , %                              

                  r                R                                 

├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤

│Формальдегид,│      11,9              12,7                26,5        

│от 0,001                                                             

│до 2,000 вкл.│                                                        

├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤

│Ацетальдегид,│       7,7              10,2                14,2        

│от 0,001                                                             

│до 0,100 вкл.│                                                        

├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤

Пропионовый        11,3              13,5                24,3        

│альдегид,                                                            

│от 0,001                                                             

│до 0,100 вкл.│                                                        

├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤

│Масляный           10,8              12,7                23,8        

│альдегид,                                                            

│от 0,001                                                              

│до 0,100 вкл.│                                                        

├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤

│Ацетон,             8,1              10,4                21,7        

│от 0,01                                                              

│до 2,00 вкл. │                                                        

└─────────────┴─────────────────┴──────────────────┴──────────────────────┘

 

10.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

 

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу диапазона измерений. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и измеренными значениями концентраций не превышает 5%.

 

10.2. Контроль повторяемости

 

    Относительное    расхождение   между   результатами   двух   измерений,

выполненных  в  соответствии  с  методикой  одним  оператором при измерении

образцов  одной  и  той  же  рабочей  пробы с использованием одних и тех же

средств  измерений  и  реактивов  в течение возможно минимального интервала

времени, не должно превышать значения предела повторяемости r  (табл. 3).

                                                             n

Повторяемость результатов параллельных определений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

 

                                     r     Х    + Х

                                      n     max    min

                      Х    - Х    <= --- х -----------,

                       max    min    100        2

 

    где:

    r  - значение предела повторяемости, %;

     n

    Х   ,  Х     -  максимальный и минимальный результаты двух параллельных

     max    min

измерений содержания i-го вещества, мкг/куб. см.

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

 

10.3. Контроль воспроизводимости

 

Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

 

                                    R_    Х  + Х

                        _    _       Хl    1    2

                         - Х | <= --- х -------,

                         1    2     100      2

 

    где:

    _

    Х  - средний  результат  анализа  рабочей  пробы  из  2-х  параллельных

     1

измерений, мкг/куб. см;

    _

    Х  - средний  результат  анализа  рабочей  пробы  из  2-х  параллельных

     2

измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см;

    R_   -  значение   предела   внутрилабораторной   воспроизводимости,  %

     Хl

(табл. 3).

                                              _    _

    Расхождение  между результатами измерений Х  и Х , полученных в  разных

                                               1    2

условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости R_  при

                                                                     Хl

доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

 

10.4. Контроль точности

 

    Контроль  точности  с использованием метода добавок состоит в сравнении

результата   контрольной  процедуры,  равного  разности  между  результатом

контрольного  измерения  содержания  определяемого  компонента  в  пробе  с

                      _                                      _

известной  добавкой  (Х'),  в  рабочей  пробе  без  добавки (Х) и величиной

добавки С  (добавка  должна   составлять   не   менее   40%  от  содержания

         д

анализируемого  компонента  в  рабочей  пробе)  с  нормативом  точности  К.

Результаты   контроля   признаются  удовлетворительными,  если  выполняется

условие:

 

                          _    _

                         |Х' - Х - С | = К ,

                                    д     k

 

    где:

    _

    Х' - средний результат контрольного измерения содержания  определяемого

компонента в  рабочей  пробе  с  известной  добавкой  из  2-х  параллельных

измерений, мкг/куб. см;

    _

    Х - средний результат контрольного измерения  содержания  определяемого

компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;

    С  - величина добавки к пробе, мкг/куб. см.

     д

 

                              ______________________________

                             /дельта   _ 2    дельта   _  2

               К = 0,84 х   /(------ х Х)  + (------ х Х') .

                          \/   100             100

 

    Качество   контрольной   процедуры   признают   удовлетворительным  при

выполнении условия: К  <= К.

                     k

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, устраняют их.

Периодичность контроля воспроизводимости и точности регламентируется в руководстве по качеству лаборатории.

 

Литература

 

1. Химическая энциклопедия/Под. ред. И.Л.Кнунянц. М.: "Советская энциклопедия", 1988. Т. 1.

2. Химическая энциклопедия/Под. ред. И.Л.Кнунянц. М.: "Советская энциклопедия", 1990. Т. 2.

3. Филов В.А., Тиунов Л.А. Вредные химические вещества. Галоген- и кислородсодержащие органические соединения: Справочник. С.-Пб.: "Химия", 1994.

4. Химическая энциклопедия/Под. ред. Н.С.Зефирова. М.: "Большая российская энциклопедия", 1995. Т. 4.

5. Химическая энциклопедия/Под. ред. Н.С.Зефирова. М.: "Большая российская энциклопедия", 1999. Т. 5.

 

Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Т.Д.Карнажицкая, Г.И.Леготкина).

 

 



Все нормативно-правовые акты по медицине // Здравоохранение, здоровье, заболевания, лечение, лекарства, доктора, больницы //

Рейтинг@Mail.ru Яндекс цитирования

Copyright © Медицинский информационный ресурс www.hippocratic.ru, 2012 - 2024