УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
9 августа 2006 года
Дата введения:
1 сентября 2006 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ ФОРМАЛЬДЕГИДА,
АЦЕТАЛЬДЕГИДА, ПРОПИОНОВОГО АЛЬДЕГИДА, МАСЛЯНОГО АЛЬДЕГИДА
И АЦЕТОНА В ПРОБАХ МОЧИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ
ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.2110-06
1. Область
применения
Методические указания по определению
концентрации алифатических альдегидов и ацетона в моче предназначены для
использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и
благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области
профпатологии и экологии человека,
научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены
окружающей среды.
Методические указания разработаны с целью
обеспечения контроля за содержанием альдегидов и
ацетона в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным
уровнем загрязнения окружающей среды.
Методические указания разработаны в
соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96
"ГСОЕИ. Методики выполнения измерений", ГОСТ Р
1.5-92 "ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и
содержанию стандартов".
Методика выполнения измерения
обеспечивает определение альдегидов в моче в диапазоне концентраций 0,001-0,10
мкг/куб. см, ацетона - 0,01-2,0 мкг/куб. см с погрешностью, не превышающей 26%
- для формальдегида, 20% - для ацетальдегида, 25% - для ацетона, 25% - для пропионового альдегида, 19% - для масляного альдегида, при
доверительной вероятности Р = 0,95.
Формальдегид (HCHO) Молекулярная масса 30,03.
Формальдегид (муравьиный альдегид, метаналь) - бесцветный газ с резким раздражающим запахом.
Температура кипения: -19,2 град. С, плотность: 0,8153 г/куб. см. Хорошо
растворим в воде, спиртах и других полярных растворителях. При низких
температурах смешивается с неполярными растворителями (толуолом, диэтиловым эфиром, этилацетатом) [5]. Обладает
раздражающим, сенсибилизирующим и кожно-резорбтивным действием, оказывает гепатотропный эффект, относится к веществам,
обусловливающим канцерогенную опасность [3].
Ацетальдегид (CH3CHO) Молекулярная масса 44,05.
Ацетальдегид (уксусный альдегид) -
бесцветная жидкость с удушающим запахом. Температура кипения: 20,16 град. С,
плотность: 0,778 г/куб. см. Смешивается во всех соотношениях с водой и
большинством органических растворителей [1]. Оказывает наркотическое,
раздражающее, мутагенное и канцерогенное действие [3].
Пропионовый
альдегид (CH3CH2CHO) Молекулярная
масса 58,08.
Пропионовый альдегид (пропаналь) - бесцветная жидкость
с характерным запахом. Температура кипения: 48,8 град. С, плотность: 0,8058
г/куб. см. Растворим в воде, смешивается со многими органическими
растворителями [4]. Оказывает наркотическое действие, вызывает изменения со
стороны дыхательной системы, паренхиматозных органов, угнетает гемопоэз [3].
Масляный альдегид (CH3(CH2)2CHO) Молекулярная масса 72,11.
Масляный альдегид (бутаналь)
- бесцветная прозрачная жидкость с резким запахом. Температура кипения: 75,7
град. С, плотность: 0,817 г/куб. см [2]. Растворим в воде, смешивается со
многими органическими растворителями. Оказывает наркотическое, раздражающее и
кожно-резорбтивное действие [3].
Ацетон (CH3COCH3) Молекулярная масса 58,08.
Ацетон (диметилкетон)
- летучая бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 56,1
град. С, плотность: 0,792 г/куб. см [1]. Смешивается с водой и органическими
растворителями (эфиром, хлороформом, бензолом, четыреххлористым углеродом). Обладает
наркотическим и кожно-резорбтивным действием, угнетает репродуктивную функцию.
Преимущественно действует на центральную нервную систему [3].
2. Сущность метода
Методика основана на предварительном
переводе альдегидов и ацетона в соответствующие 2,4-динитрофенилгидразон
производные, концентрировании продуктов дериватизации
из биологического материала экстракцией гексаном,
высушивании гексанового экстракта, растворении
высушенного остатка в ацетонитриле и анализе на
жидкостном хроматографе.
Измерение концентрации альдегидов и
ацетона выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с
использованием УФ-детектора.
Измерению не мешают спирты, органические
кислоты, кетоны и другие альдегиды.
3. Средства
измерений, вспомогательные устройства,
материалы, растворы и реактивы
При выполнении измерений применяют
следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.
3.1. Средства
измерений
Жидкостный
хроматограф "Милихром-4" с ультрафиолетовым
детектором
Весы
лабораторные ВЛР-200 аналитические ГОСТ 24104-01
Гири Г2-210
ГОСТ 7328-01
Термометр
стеклянный ГОСТ
28498-90
Микрошприцы МШ-10 ТУ
2.833.106-00
Цилиндр мерный
вместимостью 50 куб. см
ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные вместимостью 1, 5 и 10 куб. см ГОСТ 29227-91
Колбы мерные
вместимостью 50, 100, 200 и 1000 куб. см
ГОСТ 1770-74
Редуктор
кислородный ТУ
26-05-236-73
Стандартные
образцы:
Формальдегид в
воде с концентрацией 1,0 мг/куб. см
ГСО 7347-96.
3.2.
Вспомогательные устройства
Колонка металлическая
длиной 8 см и внутренним
диаметром 2 мм, заполненная сорбентом
Диасорб С16 зернением 5-6-7 мкм
Центрифуга
ЦЛМН-Р10-01-"Элекон" ТУ 9443-001-245.23530-97
Дистиллятор ТУ
61-1-721-79
Сушильный шкаф
ШСС-80 П УХЛ 4.2 ТУ 16.531.743-83
Дефлегматор
длиной 300 мм
ГОСТ 25336-86
Холодильник
шариковый ХШ-300 (6 шар.)
ГОСТ 1770-74
Холодильник
прямой ХПТ-3-300
ГОСТ 1770-74
Воронка Шотта (пор 16) ГОСТ 25336-82
Воронки
делительные вместимостью 250 куб. см
ГОСТ 23932-90
Пробирки центрифужные пропиленовые с
завинчивающейся
крышкой вместимостью
15 куб. см,
пр-во Sarstedt (Германия)
Бюксы СВ 19/9 ТУ
92-891.029-91
Стакан
термостойкий вместимостью 2 куб. дм ГОСТ 23932-90
Колбы для
перегонки круглодонные
ГОСТ 8682-93.
вместимостью
1,0; 2,0 куб. дм
3.3. Реактивы
Гексан для хроматографии, осч ТУ 6-09-4521-77
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, осч ТУ
6-09-14-2167-84
Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72
Ацетон, осч (чистота не менее 99,75) ТУ 2633-039-44493179-00
Пропионовый альдегид, чда ТУ 6-09-08-1637-83
Масляный
альдегид, чда ТУ
6-09-08-1885-86
2,4-Динитрофенилгидразин,
ч ТУ-6-09-2394-77
2,4-Динитрофенилгидразон
формальдегида,
перекристаллизованный из очищенного
этанола, чистота
не менее 99,0%
2,4-Динитрофенилгидразон
ацетальдегида,
перекристаллизованный из очищенного
этанола, чистота
не менее 99,0%
2,4-Динитрофенилгидразон
пропионового альдегида,
перекристаллизованный из очищенного
этанола, чистота
не менее 99,0%
2,4-Динитрофенилгидразон
масляного альдегида
перекристаллизованный из очищенного этанола,
чистота не менее
99,0%
Кислота
хлористоводородная (плотность 1,19), хч ГОСТ 3118-77
Перманганат
калия, ч ГОСТ 20490-75
Спирт этиловый,
очищенный от альдегидов и кетонов ГОСТ Р 51652-00
кипячением с
2,4-динитрофенилгидразином,
перегнанный
Калий двухромовокислый, чда ГОСТ 4220-75
Серная
кислота
ГОСТ 4204-77
Кислота
уксусная, хч ГОСТ 61-75
Диэтиламин, ч, перегнанный для
хроматографии ТУ 6-09-68-89
Раствор гепарина
в ампулах (5000 ед. в 1 куб. см).
3.4. Материалы
Гелий
газообразный ТУ
51-940-80.
3.5. Растворы
Хромовая смесь
Элюент для хроматографии
2 М водный раствор хлористоводородной
кислоты
0,2%-й раствор 2,4-динитрофенилгидразина в
2 М хлористоводородной кислоте
Исходный раствор альдегидов для
калибровки
Исходный раствор ацетона для калибровки.
Допускается
применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования,
химреактивов и материалов, по метрологическим и техническим характеристикам не
уступающих перечисленным.
4. Требования к
безопасности
4.1. При работе с реактивами соблюдают
требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и
легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.
4.2. При выполнении измерений с использованием
жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с
ГОСТ 12.1.019-79, противопожарной безопасности - ГОСТ 12.1.004-85 и меры
безопасности, указанные в "Руководстве по правилам эксплуатации
прибора".
5. Требования к
квалификации оператора
К выполнению измерений допускаются лица,
имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и владеющие техникой жидкостно-хроматографического анализа.
6. Условия
измерений
6.1. При подготовке проб к анализу и
приготовлении растворов соблюдают следующие условия:
- температура воздуха 15-25 град. С;
- атмосферное давление 630-800 мм рт.
ст.;
- влажность воздуха не более 80% при
температуре 25 град. С.
6.2. Выполнение измерений на жидкостном
хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией к
прибору.
7. Подготовка к
выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят
следующие работы: подготовка посуды и растворителей, приготовление растворов,
подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
7.1. Подготовка
посуды
Используемую посуду замочить на 1 ч в
хромовой смеси, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть
дистиллированной водой и просушить при температуре 120 град. С.
7.2. Подготовка
растворителей
7.2.1. Очистка ацетонитрила
от примесей. В колбу вместимостью 2 куб дм помещают 1
куб. дм ацетонитрила и 20 г
KMnO4, кипятят с шариковым холодильником в течение 1 ч, затем перегоняют с
дефлегматором при температуре 81,6 град. С, отбирая фракции по 200 куб. см.
Когда в колбе останется около 200 куб. см продукта, перегонку прекращают.
Остаток можно смешивать с новой порцией растворителя. Первую фракцию (200 куб.
см) отбрасывают, а остальные проверяют на поглощение в УФ-области
(оптическая плотность при 200 нм не должна превышать
0,05 о.е./см).
7.2.2. Очистка диэтиламина
от примесей. В колбу вместимостью 1,0 куб дм помещают
0,5 куб. дм диэтиламина и
перегоняют с прямым холодильником. Первую и последнюю порции (50 куб. см)
отбрасывают, оставляют среднюю порцию. Перегнанный раствор должен быть
бесцветным.
7.2.3. Очистка этилового спирта от
альдегидов и кетонов. К 1 куб. дм 96%-го спирта добавляют 2 г 2,4-динитрофенилгидразина, 0,5 куб.
см концентрированной хлористоводородной кислоты и кипятят с шариковым
холодильником 1 ч. Перегоняют с дефлегматором в приборе со стеклянными шлифами,
отбрасывая первые и последние 100 куб. см, после этого отгоняют вторично.
7.3. Приготовление
растворов
7.3.1. Хромовая смесь. В термостойкий
стакан вместимостью 2 куб. дм насыпают 50 г хромово-кислого калия, осторожно приливают по палочке
частями, тщательно перемешивая, 1 куб. дм
концентрированной серной кислоты.
7.3.2. Элюент для хроматографии.
Смешивают 40 куб. см дистиллированной воды с 60 куб. см очищенного ацетонитрила. Подвижную фазу фильтруют через воронку Шотта (пор 16) и дегазируют барботированием
гелия в течение 5 мин. со скоростью 50-60 куб. см /мин. Затем добавляют 2,5%
уксусной кислоты и 1% диэтиламина (объемные %).
7.3.3. Хлористоводородная кислота, 2
моль/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 1 куб. дм, наполненную до половины объема дистиллированной водой,
прибавляют 61,0 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты (плотность
1,19 г/куб. см), доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
7.3.4. 2,4-Динитрофенилгидразин, 0,2%-й
раствор в 2 М хлористоводородной кислоте. В мерную колбу на 100 куб. см вносят
0,2 г 2,4-динитрофенилгидразина и доводят до метки 2 М раствором
хлористоводородной кислоты.
7.3.5. Исходный раствор
альдегидов для калибровки (раствор А): 4 куб. см ГСО формальдегида с
концентрацией 1,0 мг/куб. см (4,0 мг), 5,0 куб. мм (3,9 мг) ацетальдегида, 5,0
куб. мм (4,03 мг) пропионового альдегида, 5,0 куб. мм
(4,08 мг) масляного альдегида переносят в мерную колбу вместимостью 200 куб.
см, содержащую дистиллированную воду, в которую предварительно добавляют 5 куб.
см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина
и доводят водой до метки. Стандартные растворы готовят с предварительным
охлаждением альдегидов и дистиллированной воды. Используют свежеприготовленный
раствор. Содержание альдегидов в растворе А составляет
(с учетом плотности и содержания основного вещества): формальдегида - 20,00
мкг/куб. см; ацетальдегида - 19,5 мкг/куб. см; пропионового
альдегида - 20,1 мкг/куб. см; масляного альдегида - 20,4 мкг/куб. см.
Исходный раствор ацетона для калибровки
(раствор В): 5,0 куб. мм (3,96 мг) ацетона переносят в мерную колбу
вместимостью 200 куб. см, содержащую дистиллированную воду, в которую
предварительно добавляют 5 куб. см 0,2%-го раствора
2,4-динитрофенилгидразина и доводят водой до метки. Используют
свежеприготовленный раствор. Содержание ацетона в растворе В
составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества) 19,8 мкг/куб.
см.
7.3.6. Получение
2,4-динитрофенилгидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового
альдегида, масляного альдегида и ацетона (используются для идентификации гидразонов альдегидов и ацетона в анализируемых пробах). Эквимолярные количества 2,4-динитрофенилгидразина и
альдегида (или ацетона) кипятят в очищенном от альдегидов и кетонов этиловом
спирте 1 ч в присутствии каталитических количеств хлористоводородной
кислоты. Выпавший в осадок 2,4-динитрофенилгидразон
соответствующего альдегида (или ацетона) отфильтровывают и перекристаллизовывают
из этанола до постоянной температуры плавления.
7.4. Подготовка хроматографической колонки
Колонку устанавливают на хроматограф и
подают элюирующую жидкость, подготовленную в
соответствии с п. 7.3.2., со скоростью 100 куб. мм/мин. до установления
равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора.
7.5. Установление градуировочной характеристики
7.5.1. Строят две зависимости площади хроматографического пика от концентрации альдегидов и
ацетона в крови в диапазонах 0,001-0,010 мкг/куб. см и 0,01-0,10 мкг/куб. см -
для альдегидов, 0,01-0,10 мкг/куб. см и 0,1-2,0 мкг/см
- для ацетона. Градуировочные характеристики
устанавливают по пяти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую
из пяти растворов, готовят из растворов А и В (см. п.
7.3.5.).
7.5.2. Для приготовления градуировочных смесей собирается суммарная проба мочи
объемом не менее 1,5 куб. дм (от нескольких человек).
В соответствии с п. 8 проводят анализ пробы мочи на содержание альдегидов и
ацетона. При наличии анализируемых веществ в холостой пробе вычитают их фоновое
содержание при построении калибровки.
7.5.3. Растворы для установления градуировочных характеристик готовят в мерных колбах
вместимостью 50 куб. см. Для этого в каждую колбу вносят растворы А и В в соответствии с табл. 1 и
2, доводят объем до метки мочой и перемешивают. Анализируют свежеприготовленные
растворы.
Таблица 1
РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ
ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В МОЧЕ АЛЬДЕГИДОВ
В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,001-0,010 МКГ/КУБ. СМ
И АЦЕТОНА В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ
0,01-0,10 МКГ/КУБ. СМ
Номер
раствора
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
Объем раствора А, куб. см
|
0,0025
|
0,005
|
0,010
|
0,015
|
0,025
|
Массовая
концентрация формальдегида,
мкг/куб. см
|
0,001
|
0,002
|
0,004
|
0,006
|
0,01
|
Массовая
концентрация ацетальдегида,
мкг/куб. см
|
0,001
|
0,002
|
0,004
|
0,006
|
0,01
|
Массовая
концентрация пропионового
альдегида, мкг/куб. см
|
0,001
|
0,002
|
0,004
|
0,006
|
0,01
|
Массовая
концентрация масляного
альдегида, мкг/куб. см
|
0,001
|
0,002
|
0,004
|
0,006
|
0,01
|
Объем раствора В, куб. см
|
0,025
|
0,050
|
0,100
|
0,150
|
0,250
|
Массовая
концентрация ацетона,
мкг/куб. см
|
0,01
|
0,02
|
0,04
|
0,06
|
0,10
|
Таблица 2
РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ
ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В МОЧЕ АЛЬДЕГИДОВ
В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,01-0,10 МКГ/КУБ. СМ
И АЦЕТОНА В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ
0,1-2,0 МКГ/КУБ. СМ
Номер
раствора
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
Объем раствора А, куб. см
|
0,025
|
0,050
|
0,100
|
0,150
|
0,250
|
Массовая
концентрация формальдегида,
мкг/куб. см
|
0,01
|
0,02
|
0,04
|
0,06
|
0,10
|
Массовая
концентрация ацетальдегида,
мкг/куб. см
|
0,01
|
0,02
|
0,04
|
0,06
|
0,10
|
Массовая
концентрация пропионового
альдегида, мкг/куб. см
|
0,01
|
0,02
|
0,04
|
0,06
|
0,10
|
Массовая
концентрация масляного
альдегида, мкг/куб. см
|
0,01
|
0,02
|
0,04
|
0,06
|
0,10
|
Объем раствора В, куб. см
|
0,25
|
0,50
|
1,25
|
2,50
|
5,00
|
Массовая
концентрация ацетона,
мкг/куб. см
|
0,1
|
0,2
|
0,5
|
1,0
|
1,98
|
В делительную воронку помещают 50 куб. см
градуировочного раствора, добавляют 2,5 куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М
хлористоводородной кислоте, 2 капли концентрированной хлористоводородной
кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин.
После расслоения гексана и мочи верхний слой (гексановый) переносят в центрифужную
пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 20 мин. со скоростью 1500
об./мин., затем 2 куб. см гексана переносят в бюксу и высушивают в потоке воздуха.
Высушенный остаток растворяют в 0,5 куб. см элюента и аликвотную часть (10 куб.
мм) анализируют в условиях:
элюент - (ацетонитрил:вода = 60:40) + 2,5% уксусной кислоты + 1% диэтиламина;
колонка 80х2 мм,
заполнена Диасорбом С16
скорость
движения элюента
100 куб. мм/мин.;
длина волны УФ-детектора 358 нм;
время
удерживания:
2,4-динитрофенилгидразона
формальдегида 3,10
мин.;
2,4-динитрофенилгидразона
ацетальдегида 3,95
мин.;
2,4-динитрофенилгидразона
ацетона 4,70
мин.;
2,4-динитрофенилгидразона
пропаналя 5,04 мин.;
2,4-динитрофенилгидразона
бутаналя 7,95 мин.
Градуировочный
коэффициент рассчитывают по формуле:
n
SUM = С / S
i=1 i i
К = -------------,
n
где:
С - концентрация
вещества в градуировочной смеси, мкг/куб. см;
i
S
- среднее значение
пяти измерений площади пика i-й концентрации,
i
единицы
оптической плотности (е.о.п.);
n - количество градуировочных
смесей (n = 5).
7.6. Отбор проб
Для отбора проб мочи используют чистую
стеклянную посуду объемом 100 куб. см с плотно закрывающейся крышкой. Срок
хранения пробы в холодильнике - 12 ч.
8. Выполнение
измерений
Проводят два параллельных измерения
образца мочи. В делительную воронку вместимостью 250 куб. см помещают 50,0 куб.
см мочи, добавляют 2,5 куб. см 0,2%-го раствора
2,4-динитрофенилгидразина в 2 М хлористоводородной кислоте, 2 капли
концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана
и экстрагируют 15 мин. После отстаивания верхний слой (гексановый)
переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся
крышкой и центрифугируют 20 мин. со скоростью 1500 об./мин. После расслоения жидкостей 2 куб. см гексанового экстракта переносят в бюксу и высушивают в
потоке воздуха. Высушенный остаток растворяют в 0,5 куб. см элюента, вводят в
хроматограф аликвотную часть (10 куб. мм) и анализируют в условиях, указанных в
п. 7.5.
Идентификацию хроматографических
пиков 2,4-динитрофенилгидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового и масляного альдегидов и ацетона проводят
путем сравнения времен удерживания хроматографических
пиков в анализируемой пробе и в растворах 2,4-динитрофенилгидразонов альдегидов
и ацетона, полученных согласно п. 7.3.6.
9. Вычисление
результатов измерения
Концентрацию альдегидов и ацетона в моче
(мкг/куб. см) вычисляют по формуле:
Х = S х К,
i
где:
Х - концентрация вещества в анализируемой
пробе, мкг/куб. см;
S -
площадь пика соответствующего 2,4-динитрофенилгидразона альдегида
i
(или ацетона) в
анализируемой пробе, е.о.п.;
К - градуировочный
коэффициент.
_
За
результат измерения Х
принимают среднее арифметическое двух
параллельных измерений
Х , Х ,
расхождение между которыми
не должно
1 2
превышать
значения предела повторяемости r (табл.
3).
n
_
Результат измерения представляют в
виде (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб.
см,
где ДЕЛЬТА -
характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95,
равная:
_
дельта х Х
ДЕЛЬТА =
----------,
100
где дельта - относительное значение
характеристики погрешности, %.
10. Внутренний
оперативный контроль результатов измерений
Внутренний контроль качества (ВКК)
результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная
прецизионность (воспроизводимость),
точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве
результатов измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его
повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ.
Внутренний контроль качества результатов количественного химического
анализа".
Методика выполнения измерений
обеспечивает получение результатов измерений с нормативами, не превышающими
значений, приведенных в табл. 3 и 4.
Таблица 3
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И
ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р
= 0,95
┌─────────────────────┬────────────────────┬──────────────────────────────┐
│ Наименование │Предел повторяемости│ Предел внутрилабораторной │
│ определяемого │
(относительное │ воспроизводимости │
│ компонента и │ значение │
(относительное значение │
│
диапазон измерений, │
допускаемого │допускаемого расхождения между│
│ мкг/куб. см │ расхождения между │двумя результатами измерений, │
│ │ двумя результатами │
полученными в одной │
│ │ параллельных │
лаборатории, но в разных │
│ │определений),
r , % │ условиях), R , %
│
│ │ n │ _ │
│ │ │ Хl │
├─────────────────────┼────────────────────┼──────────────────────────────┤
│Формальдегид, │ 26,8 │ 27,2 │
│от
0,001 до 0,1 вкл. │
│
│
├─────────────────────┼────────────────────┼──────────────────────────────┤
│Ацетальдегид, │ 16,8 │ 24,7 │
│от
0,001 до 0,1 вкл. │
│
│
├─────────────────────┼────────────────────┼──────────────────────────────┤
│Пропионовый альдегид,│ 24,5 │ 26,1 │
│от
0,001 до 0,1 вкл. │
│
│
├─────────────────────┼────────────────────┼──────────────────────────────┤
│Масляный
альдегид, │ 23,7 │ 25,9 │
│от
0,001 до 0,1 вкл. │
│
│
├─────────────────────┼────────────────────┼──────────────────────────────┤
│Ацетон, │ 24,9 │ 26,8 │
│от
0,01 до 2,0 вкл. │ │ │
└─────────────────────┴────────────────────┴──────────────────────────────┘
Таблица 4
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
ТОЧНОСТИ,
ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
Наименование
определяемого
компонента и
диапазон
измерений, мг/куб.
дм (мкг/куб. см)
|
Показатель
повторяемости
(относительное
среднеквадрати-
ческое отклонение
повторяемости),
сигма , %
r
|
Показатель
воспроизводимости
(относительное
среднеквадрати-
ческое отклонение
воспроизводимо-
сти), сигма , %
R
|
Показатель
точности
(границы
относительной
погрешности при
вероятности
Р = 0,95),
+/- дельта, %
|
Формальдегид,
от 0,001 до 2,0 вкл.
|
9,9
|
10,7
|
26,0
|
Ацетальдегид,
от 0,001 до 0,1 вкл.
|
7,1
|
9,3
|
20,0
|
Пропионовый альдегид,
от 0,001 до 0,1 вкл.
|
7,6
|
13,3
|
25,0
|
Масляный
альдегид,
от 0,001 до 0,1 вкл.
|
8,5
|
10,6
|
19,0
|
Ацетон,
от 0,01 до 2,0 вкл.
|
11,2
|
14,4
|
25,0
|
10.1. Контроль
стабильности градуировочного графика
Контроль стабильности градуировочной
характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений.
Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных
растворах, которые соответствует началу, середине и концу диапазона измерений.
Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и
измеренными значениями концентраций не превышает 5%.
10.2. Контроль
повторяемости
Относительное расхождение между
результатами двух измерений,
выполненных в соответствии
с методикой одним
оператором при измерении
образцов одной
и той же
рабочей пробы с использованием
одних и тех же
средств измерений
и реактивов в течение возможно минимального интервала
времени, не
должно превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n
Повторяемость результатов параллельных определений признают
удовлетворительной, если выполняется условие:
r Х
+ Х
n max min
Х - Х
<= --- х -----------,
max min 100
2
где:
r -
значение предела повторяемости, %;
n
Х , Х -
максимальный и минимальный
результаты двух параллельных
max min
измерений
содержания i-го вещества, мкг/куб. см.
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.3. Контроль воспроизводимости
Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы.
Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой,
максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное
время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и
т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных
измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:
_ _
R Х +
Х
_ 1
2
_ _
Хl
|Х - Х | <= --- х -------,
1 2
100 2
где:
_
Х
- средний результат
анализа рабочей пробы
из 2-х параллельных
1
измерений,
мкг/куб. см;
_
Х
- средний результат
анализа рабочей пробы
из 2-х параллельных
2
измерений,
полученный в других условиях, мкг/куб. см;
R
- значение предела
внутрилабораторной воспроизводимости, %
_
Хl
(табл. 3).
_ _
Расхождение
между результатами измерений
Х и Х ,
полученных в разных
1 2
условиях, не
должно превышать значений показателя воспроизводимости
R при
_
Хl
доверительной
вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.4. Контроль
точности
Контроль
точности с использованием метода
добавок состоит в сравнении
результата контрольной
процедуры, равного разности
между результатом
контрольного измерения
содержания определяемого компонента
в пробе с
_ _
известной добавкой
(Х'), в рабочей
пробе без добавки (Х) и величиной
добавки С (добавка
должна составлять не
менее 40% от
содержания
d
анализируемого компонента
в рабочей пробе)
с нормативом точности
К.
Результаты контроля
признаются
удовлетворительными, если выполняется
условие:
_ _
|Х' - Х - С | = К ,
д k
где:
_
Х' -
средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в
рабочей пробе с
известной добавкой из 2-х
параллельных
измерений,
мкг/куб. см;
_
Х
- средний результат контрольного
измерения содержания определяемого
компонента в
рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;
С - величина добавки к
пробе, мкг/куб. см;
д
______________________________
/дельта _ 2
дельта _ 2
К = 0,84 х /(------ х Х) + (------ х Х') .
\/ 100 100
Качество
контрольной процедуры признают
удовлетворительным при
выполнении условия: К
<= К.
k
При превышении норматива контроля
точности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива
выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и
устраняют их.
Периодичность контроля воспроизводимости и точности регламентируется в руководстве
по качеству лаборатории.
Литература
1. Химическая энциклопедия/Под. ред. И.Л.Кнунянц.
М.: "Советская энциклопедия", 1988. Т. 1.
2. Химическая энциклопедия/Под. ред. И.Л.Кнунянц.
М.: "Советская энциклопедия", 1990. Т. 2.
3. Филов В.А., Тиунов Л.А. Вредные
химические вещества. Галоген- и кислородсодержащие
органические соединения: Справочник. С.-Пб.: "Химия",
1994.
4. Химическая энциклопедия/Под. ред. Н.С.Зефирова.
М.: "Большая российская энциклопедия", 1995. Т. 4.
5. Химическая энциклопедия/Под. ред. Н.С.Зефирова.
М.: "Большая российская энциклопедия", 1999. Т. 5.
Методические указания разработаны
Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Т.Д.Карнажицкая).