|
Номер смеси для
градуировки |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
2-Хлорфенол,
объем исходного аттестованного |
0,1 |
0,5 |
1,0 |
2,0 |
3,5 |
|
Содержание
2-хлорфенола, мкг/куб. см |
0,05 |
0,25 |
0,5 |
1,0 |
1,77 |
Для построения градуировочной
характеристики 2-хлорфенола аттестованный раствор в объеме 50 куб. см помещают
в делительную воронку объемом 250 куб. см, добавляют 30 г высаливателя (хлорид
натрия), подкисляют раствором соляной кислоты (1:3) до pH = 2 и приливают 5
куб. м реагента для экстракции (раствор камфары в бутилацетате). Содержимое
воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания эфирный экстракт
сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин.
В хроматографическую колонку через
испаритель вводят по 2 куб. м каждого экстракта аттестованного раствора и
анализируют в условиях:
температура термостата колонок - 110
град. С;
температура испарителя - 170 град. С;
температура детектора - 250 град. С;
расход газа-носителя (азот) - 30 куб.
см/мин.;
скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч;
время удерживания 2-хлорфенола - 1 мин.
На полученной хроматограмме определяют
площади пиков 2-хлорфенола и по средним результатам из 5 серий строят
градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при
смене партии реактивов.
7.6. Отбор проб
Отбор проб мочи в объеме не менее 200
куб. см производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой.
Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после
отбора пробы.
8. Выполнение
измерений
Для определения 2-хлорфенола мочу в
объеме 50 куб. см помещают в делительную воронку объемом 250 куб. см, добавляют
30 г высаливателя (хлорид натрия), подкисляют раствором соляной кислоты (1:3)
до pH = 2 и приливают 5 куб. см реагента для экстракции (раствор камфары в
бутилацетате). Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после
отстаивания эфирный экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для
денатурации белка 10 мин.
Полученный центрифугат хроматографируют и проводят количественное определение
анализируемого соединения в подготовленной пробе по калибровочному графику.
Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение
измерений двух параллельных проб мочи. Условия выполнения измерений аналогичны
условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 7.5.).
9. Вычисление
результатов измерений
На хроматограмме рассчитывают площадь
пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию 2-хлорфенола в
моче.
За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух
параллельных определений Х , Х , расхождение между которыми не должно
max min
превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n
Расчет концентраций 2-хлорфенола ведут по формуле:
А х V
экст.
Ч = ----------,
V х V
1 2
где:
А - количество компонента, найденное по калибровочному графику, мкг;
V - объем экстрагента, куб. см;
экст.
V - объем экстрагируемой мочи, куб. см;
1
V - объем хроматографируемой пробы, куб. см.
2
_
Результат измерений представляют в виде (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб. см,
где:
_
Х - средний результат анализа, мкг/куб. см:
Х + Х
_ max min
Х = -----------,
2
при условии:
r Х + Х
n max min
Х - Х <= --- х -----------,
max min 100 2
где:
Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;
max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений;
min
r - значение предела повторяемости, %;
n
ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95, равная:
_
дельта х Х
ДЕЛЬТА = ----------,
100
где дельта - относительное значение характеристики погрешности, %.
10. Внутренний
контроль качества результатов измерений
Внутренний контроль качества (ВКК)
результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность
(воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной
информации о качестве измерений и принятия при необходимости оперативных мер по
его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ.
Внутренний контроль качества результатов количественного химического
анализа".
Методика выполнения измерений
обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей
значений, приведенных в табл. 2 и 3.
Таблица 2
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
ТОЧНОСТИ,
ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
┌─────────────────┬──────────────────┬────────────────────┬───────────────┐
│ Наименование │Показатель повто- │Показатель воспроиз-│Показатель точ-│
│ определяемого │ряемости (относи- │водимости (относи- │ности (границы │
│ компонента и │тельное среднеква-│тельное среднеквад- │относительной │
│ диапазон │дратическое откло-│ратическое отклоне- │погрешности при│
│ измерений, │нение повторяемо- │ние воспроизводимо- │вероятности │
│ мкг/куб. см │сти), сигма , % │сти), сигма │Р = 0,95), │
│ │ r │ R , % │+/- дельта, % │
│ │ │ _ │ │
│ │ │ Xl │ │
├─────────────────┼──────────────────┼────────────────────┼───────────────┤
│2-Хлорфенол, от │ 11,7 │ 12,3 │ 23,0 │
│0,05 до 1,80 вкл.│ │ │ │
└─────────────────┴──────────────────┴────────────────────┴───────────────┘
Таблица 3
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И
ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р
= 0,95
┌──────────────────────────┬───────────────────┬──────────────────────────┐
│Наименование определяемого│Предел повторяемос-│Предел внутрилабораторной │
│ компонента и диапазон │ти (относительное │воспроизводимости (относи-│
│ измерений, мкг/куб. см │значение допускае- │тельное значение допускае-│
│ │мого расхождения │мого расхождения между │
│ │между двумя резуль-│двумя результатами измере-│
│ │параллельных опре- │ний, полученными в одной │
│ │делений), r , % │лаборатории, но в разных │
│ │ n │условиях), R , % │
│ │ │ _ │
│ │ │ Xl │
├──────────────────────────┼───────────────────┼──────────────────────────┤
│2-Хлорфенол, │ 22,3 │ 28,4 │
│от 0,05 до 1,80 вкл. │ │ │
└──────────────────────────┴───────────────────┴──────────────────────────┘
10.1. Контроль
стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочного
графика проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений, определяют
содержание исследуемого соединения в градуировочных растворах, которые
соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала. Градуировка
признается стабильной, если расхождение между заданным и измеренным значением
концентраций не превышает 5%.
10.2. Контроль
повторяемости
Относительное расхождение между результатами двух измерений,
выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении
образцов одной и той же рабочей пробы с использованием одних и тех же
средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала,
не должно превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n
Повторяемость результатов параллельных измерений признают
удовлетворительной, если:
r Х + Х
n max min
Х - Х <= --- х -----------,
max min 100 2
где:
r - значение предела повторяемости, %;
n
Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;
max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений.
min
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.3. Контроль
воспроизводимости
Внутренний контроль воспроизводимости
проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и
анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения
анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа,
разные наборы мерной посуды и т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных
измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:
R _ _
_ Х + Х
_ _ Xl 1 2
|Х - Х | <= --- х -------,
1 2 100 2
где:
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
1
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
2
измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см;
R - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, %
_
Xl
(табл. 3).
_ _
Расхождение между результатами измерений Х и Х , полученных в разных
1 2
условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости R при
_
Xl
доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.4. Оперативный
контроль точности
Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении
результата контрольной процедуры, равного разности между результатом
контрольного измерения содержания 2-хлорфенола в пробе с известной добавкой
_1 _
(Х ), в рабочей пробе без добавки (Х) и величиной добавки С (добавка
д
должна составлять не менее 40% от содержания 2-хлорфенола в рабочей пробе)
с нормативом точности К.
Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется
условие:
_1 _
|Х - Х - С | = К ,
д k
где:
_1
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;
С - величина добавки к пробе, мкг/куб. см;
д
______________________________
/дельта _ 2 дельта _1 2
К = 0,84 х /(------ х Х) + (------ х Х ) .
\/ 100 100
Качество контрольной процедуры признают удовлетворительным при
выполнении условия: К <= К.
k
При превышении оперативного контроля
погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного
норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам
контроля, устраняют их и процедуру контроля повторяют.
Периодичность ВКК регламентируется в
Руководстве по качеству лаборатории.
Литература
1. Бандман А.Л., Войтенко Г.А., Волкова
Н.В. и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галогенпроизводные
углеводородов. Справ. изд./Под
ред. В.А.Филова и др. Л.: "Химия", 1990.
Методические указания разработаны
Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии
(Т.С.Уланова, Т.В.Нурисламова, Н.А.Попова).