|
Номер смеси |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
|
Фенол, объем
исходного |
0,005 |
0,010 |
0,015 |
0,020 |
0,040 |
0,050 |
0,060 |
|
Содержание
фенола, мкг/куб. см |
0,04 |
0,08 |
0,12 |
0,16 |
0,32 |
0,40 |
0,48 |
|
Нафталин, объем
исходного |
0,10 |
0,09 |
0,07 |
0,05 |
0,03 |
0,02 |
0,01 |
|
Содержание
нафталина, |
0,80 |
0,72 |
0,56 |
0,40 |
0,24 |
0,16 |
0,08 |
7.5. Определение градуировочных коэффициентов фенола
по отношению к внутреннему стандарту
Определение градуировочных
коэффициентов. 50 куб. см рабочего аттестованного раствора помещают в
делительную воронку объемом 250 куб. см и добавляют 2 г кристаллического
карбоната натрия. Плавным покачиванием перемешивают содержимое воронки, затем
вводят в воронку 0,3 куб. см йодистого метила и встряхивают в течение 5 мин.
для перевода фенола в метилфениловый эфир.
Продукт метилирования
экстрагируют 10 куб. см диэтилового эфира в течение
10 мин. Подготовленные пробы - экстракты центрифугируют для денатурации белка в
течение 10 мин., затем помещают в бюксу и упаривают под ИК-лампой
до 1 куб. см.
В хроматографическую
колонку через испаритель вводят по 10 куб. мм каждого экстракта рабочего
аттестованного раствора и анализируют в условиях:
температура термостата колонок - 110 град. С;
температура испарителя - 170 град. С;
температура детектора - 170 град. С;
расход газа-носителя (гелий) - 30 куб. см/мин.;
скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч;
время удерживания метилфенилового эфира - 4 мин. 05 с;
нафталина - 6 мин. 45 с.
На полученной хроматограмме определяют высоты или площади пиков
анализируемого компонента и внутреннего стандарта (нафталин) и по средним
результатам из 7 серий рассчитывают градуировочные коэффициенты.
Значение градуировочного коэффициента К вычисляют по формуле:
i/ст
S х Q
ст i
К
= --------,
i/ст S х Q
i ст
где:
S , S - площади пиков исследуемого компонента (метилфениловый эфир) и
i ст
внутреннего стандарта (нафталин), кв. мм;
Q , Q - количество исследуемого компонента (метилфениловый эфир) и
i ст
внутреннего стандарта (нафталин), мкг.
По результатам 7 измерений определяется среднее значение
градуировочного коэффициента К и строится градуировочный график в
i/ст
координатах: градуировочный коэффициент - отношение площадей пиков
S / S . Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии
i ст
реактивов.
7.6. Отбор проб
Отбор проб венозной крови в объеме не
менее 10 куб. см производится в тщательно вымытую стеклянную пробирку с
притертой пробкой, в которую предварительно добавлено 0,1 куб. см раствора
гепарина. Анализ крови проводить сразу или хранить в морозильной камере не
более 5 дней.
8. Выполнение
измерений
Пробу крови объемом 2 куб. см доводят до
50 куб. см бидистиллированной водой и помещают в
делительную воронку объемом 250 куб. см, добавляют внутренний стандарт -
нафталин 0,1 куб. см. Затем добавляют 2 г кристаллического карбоната натрия.
Плавным покачиванием перемешивают содержимое воронки, затем вводят в воронку
0,3 куб. см йодистого метила и встряхивают в течение 5 мин. для перевода фенола
в метилфениловый эфир.
Продукт метилирования
экстрагируют 10 куб. см диэтилового эфира в течение
10 мин. Подготовленную пробу - экстракт центрифугируют для денатурации белка в
течение 10 мин., затем помещают в бюксу и упаривают под ИК-лампой
до 1 куб. см. Полученный экстракт хроматографируют и
проводят количественное определение анализируемого соединения в подготовленной
пробе методом внутреннего стандарта. Процедуру повторяют аналогично для второго
образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб крови. Условия
выполнения измерений аналогичные, как при установлении градуировочной
характеристики (п. 7.5.).
9. Вычисление
результатов измерений
На хроматограмме
рассчитывают площади пиков метилфенилового эфира и
внутреннего стандарта (нафталина).
За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух
параллельных определений Х , Х , расхождение между которыми не должно
max min
превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n
Расчет концентрации фенола (мкг/куб. см) в биопробе вычисляют по
формуле:
S х m х К
i ст i/ст
Х = ----------------,
S х V
ст
где:
Х - концентрация фенола в биопробе, мкг/куб. см;
S , S - площади пиков метилфенилового эфира и нафталина, кв. мм;
i ст
К - градуировочный коэффициент (устанавливается по градуировочному
i/ст
графику - К -
S / S );
i/ст i ст
m - навеска нафталина, мкг;
ст
V - объем пробы, куб. см.
_
Результат измерений представляют в виде (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб. см,
где:
_
Х - средний результат измерений, мкг/куб. см:
Х + Х
_ max min
Х = -----------,
2
при условии:
r Х + Х
n max min
Х - Х <= --- х -----------,
max min 100 2
где:
Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;
max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений;
min
r - значение предела повторяемости, %;
n
ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95, равная:
_
дельта х Х
ДЕЛЬТА = ----------,
100
где дельта - относительное значение характеристики погрешности, %
(табл. 2).
10. Внутренний
контроль качества
Внутренний контроль качества (ВКК)
результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная
прецизионность (воспроизводимость),
точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве
измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в
соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний
контроль качества результатов количественного химического анализа".
Методика выполнения измерений
обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей
значений, приведенных в табл. 2 и 3.
Таблица 2
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
ТОЧНОСТИ,
ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
┌─────────────────┬──────────────────┬────────────────────┬───────────────┐
│ Наименование │Показатель повто- │Показатель воспроиз-│ Показатель │
│ определяемого │ряемости (относи- │водимости (относи- │ точности │
│ компонента и │тельное среднеква-│тельное среднеквад- │ (границы │
│ диапазон │дратическое откло-│ратическое отклоне- │ относительной │
│ измерений, │нение повторяемо- │ние воспроизводимо- │погрешности при│
│ мкг/куб. см │сти), сигма , % │сти), сигма │ вероятности │
│ │ r │ R , % │ Р = 0,95), │
│ │ │ _ │ +/- дельта, % │
│ │ │ Xl │ │
├─────────────────┼──────────────────┼────────────────────┼───────────────┤
│Фенол, от 0,04 │ 10,5 │ 10,7 │ 24,8 │
│до 0,50 вкл. │ │ │ │
└─────────────────┴──────────────────┴────────────────────┴───────────────┘
Таблица 3
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И
ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р
= 0,95
┌──────────────────────────┬───────────────────┬──────────────────────────┐
│Наименование определяемого│Предел повторяемо- │Предел внутрилабораторной │
│ компонента и диапазон │сти (относительное │воспроизводимости (относи-│
│ измерений, мкг/куб. см │значение допускае- │тельное значение допускае-│
│ │мого расхождения │мого расхождения между │
│ │между двумя резуль-│двумя результатами измере-│
│ │татами параллельных│ний, полученными в одной │
│ │определений), r , %│лаборатории, но в разных │
│ │ n │условиях), R , % │
│ │ │ _ │
│ │ │ Xl │
├──────────────────────────┼───────────────────┼──────────────────────────┤
│Фенол, от 0,04 до 0,50 │ 12,9 │ 29,6 │
│вкл. │ │ │
└──────────────────────────┴───────────────────┴──────────────────────────┘
10.1. Контроль
стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной
характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений.
Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных
растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного
интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданным и
измеренным значением концентраций не превышает 5%.
10.2. Контроль
повторяемости
Относительное расхождение между результатами двух измерений,
выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении
образцов одной и той же рабочей пробы с использованием одних и тех же
средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала
времени, не должно превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n
Повторяемость результатов параллельных измерений признают
удовлетворительной, если:
r Х + Х
n max min
Х - Х <= --- х -----------,
max min 100 2
где:
r - значение предела повторяемости, %;
n
Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;
max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений.
min
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.3. Контроль воспроизводимости
Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы.
Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой,
максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное
время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и
т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных
измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:
R _ _
_ Х + Х
_ _ Xl 1 2
|Х - Х | <= --- х -------,
1 2 100 2
где:
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
1
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
2
измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см;
R - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, %
_
Xl
(табл. 3).
_ _
Расхождение между результатами измерений Х и Х , полученных в разных
1 2
условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости R при
_
Xl
доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.4. Контроль
точности
Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении
результата контрольной процедуры, равного разности между результатом
_1
контрольного измерения содержания фенола в пробе с известной добавкой (Х ),
_
в рабочей пробе без добавки (Х) и величиной добавки С (добавка должна
д
составлять не менее 40% от содержания фенола в рабочей пробе) с нормативом
точности К.
Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется
условие:
_1 _
|Х - Х - С | = К ,
д k
где:
_1
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;
С - величина добавки к пробе, мкг/куб. см;
д
______________________________
/дельта _ 2 дельта _1 2
К = 0,84 х /(------ х Х) + (------ х Х ) .
\/ 100 100
Качество контрольной процедуры признают удовлетворительным при
выполнении условия: К <= К.
k
При превышении оперативного контроля
погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного
норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам
контроля, устраняют их и процедуру контроля повторяют.
Периодичность ВКК регламентируют согласно
руководству по качеству лаборатории.
Литература
1. Бандман
А.Л., Войтенко Г.А., Волкова Н.В. и др. Вредные химические вещества.
Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов: Справ. изд./Под ред. В.А.Филова
и др. Л.: "Химия", 1990.
Методические указания разработаны
Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Т.В.Нурисламова, Н.А.Попова).