|
Номер смеси |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
Фенол, |
0,005 |
0,01 |
0,02 |
0,025 |
0,04 |
0,05 |
|
Концентрация
фенола, мкг/куб. см |
0,04 |
0,08 |
0,16 |
0,20 |
0,32 |
0,40 |
|
Нафталин, |
0,10 |
0,09 |
0,07 |
0,05 |
0,03 |
0,02 |
|
Концентрация
нафталина, мкг/куб. см |
0,80 |
0,72 |
0,56 |
0,40 |
0,24 |
0,16 |
Для определения градуировочных
коэффициентов в делительную воронку объемом 250 куб. см вносят 50 куб. см
рабочего аттестованного раствора и добавляют 2 г кристаллического карбоната
натрия. Плавным покачиванием перемешивают содержимое воронки, затем вводят в
воронку 0,3 куб. см уксусного ангидрида и встряхивают в течение 0,5 мин. для
перевода фенола в уксуснокислый эфир.
Продукт ацилирования
дважды экстрагируют метиленхлоридом порциями по 2,5
куб. см в течение 2 мин. Экстракты центрифугируют в течение 10 мин. После
удаления белка объединенные органические вытяжки
помещают в бюксу и упаривают под ИК-лампой до 1 куб. см.
В хроматографическую
колонку через испаритель вводят по 10 мм каждого экстракта рабочего
аттестованного раствора и анализируют в условиях:
температура термостата колонок - 110
град. С;
температура испарителя - 170 град. С;
температура детектора - 170 град. С;
расход газа-носителя (гелий) - 30 куб.
см/мин.;
скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч;
время удерживания ацетата фенола - 3 мин. 20 с;
нафталина - 6 мин.
На полученной хроматограмме определяют высоты или площади пиков
определяемого компонента и внутреннего стандарта и по средним результатам
из 6 серий рассчитывают градуировочные коэффициенты.
Значение градуировочного коэффициента К вычисляют по формуле:
i/ст
S х Q
ст i
К
= --------,
i/ст S х Q
i ст
где:
S , S - площади пиков исследуемого компонента (фенилацетата) и
i ст
внутреннего стандарта (нафталина), кв. мм;
Q , Q - количество исследуемого компонента (фенилацетата) и
i ст
внутреннего стандарта (нафталина), мкг.
По результатам 7 измерений определяется среднее значение
градуировочного коэффициента К и строится градуировочный график в
i/ст
координатах градуировочный коэффициент - отношение площадей пиков S / S .
i ст
Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.
7.5. Отбор проб
Отбор проб мочи в объеме не менее 200
куб. см производят в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой.
Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после
отбора пробы.
8. Выполнение
измерений
Пробу мочи в объеме 50 куб. см помещают в
делительную воронку объемом 250 куб. см, добавляют внутренний стандарт -
нафталин 0,1 куб. см (исходный аттестованный раствор 400 мкг/куб. см) и 2 г
кристаллического карбоната натрия. Плавным покачиванием перемешивают содержимое
воронки, затем вводят в воронку 0,3 куб. см уксусного ангидрида и встряхивают в
течение 0,5 мин. для перевода фенола в уксуснокислый эфир. Продукт ацилирования дважды экстрагируют метиленхлоридом
порциями по 2,5 куб. см в течение 2 мин. Экстракты объединяют и центрифугируют
в течение 10 мин. После удаления белка объединенные
органические вытяжки помещают в бюксу и упаривают под ИК-лампой до 1 куб. см.
Полученный экстракт хроматографируют и проводят
количественное определение анализируемого соединения в подготовленной пробе
методом внутреннего стандарта. Процедуру повторяют аналогично для второго
образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб мочи. Условия выполнения
измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной
характеристики (п. 7.4.).
9. Вычисление
результатов измерений
На хроматограмме рассчитывают площади пиков фенилацетата и внутреннего
стандарта (нафталина).
За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух
параллельных измерений Х , Х , расхождение между которыми не должно
max min
превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).
n
Расчет концентрации фенола (мкг/куб. см) в биопробе вычисляют по
формуле:
S х m х К
i ст i/ст
Х = ----------------,
S х V
ст
где:
X - концентрация фенола в биопробе, мкг/куб. см;
S , S - площади пиков фенилацетата и нафталина, кв. мм;
i ст
К - градуировочный коэффициент (устанавливается по градуировочному
i/ст
графику - К -
S / S );
i/ст i ст
m - навеска нафталина, мкг;
ст
V - объем пробы, куб. см.
Результат измерения представляют в виде:
_
(Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб. см,
где:
Х + Х
_ _ max min
Х - средний результат анализа, мкг/куб. см, Х = -----------,
2
при условии:
r Х + Х
n max min
Х - Х <= --- х -----------,
max min 100 2
где:
Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;
max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений;
min
r - значение предела повторяемости, %;
n
ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95, равная:
_
дельта х Х
ДЕЛЬТА = ----------,
100
где:
дельта - относительное значение характеристики погрешности, %
(табл. 2).
10. Внутренний
контроль качества результатов измерений
Внутренний контроль качества (ВКК)
результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная
прецизионность (воспроизводимость),
точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве
измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в
соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний
контроль качества результатов количественного химического анализа".
Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с
погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2 и 3.
Таблица 2
ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
ТОЧНОСТИ, ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
┌─────────────┬─────────────────┬────────────────────┬────────────────────┐
│Наименование │Показатель │ Показатель │ Показатель точности│
│определяемого│повторяемости │ воспроизводимости │ (границы │
│компонента и │(относительное │ (относительное │ относительной │
│ диапазон │среднеквадратиче-│среднеквадратическое│ погрешности при │
│ измерений, │ское отклонение │ отклонение │ вероятности │
│ мкг/куб. см │повторяемости), │воспроизводимости), │ Р = 0,95), │
│ │дельта , % │ дельта , % │ +/- дельта, % │
│ │ r │ R_ │ │
│ │ │ Хl │ │
├─────────────┼─────────────────┼────────────────────┼────────────────────┤
│Фенол, │ 6,9 │ 2,9 │ 10,0 │
│от 0,04 │ │ │ │
│до 0,40 вкл. │ │ │ │
└─────────────┴─────────────────┴────────────────────┴────────────────────┘
Таблица 3
ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И
ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ
ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р
= 0,95
┌─────────────────────┬─────────────────────┬─────────────────────────────┐
│ Наименование │Предел повторяемости │ Предел внутрилабораторной │
│ определяемого │ (относительное │ воспроизводимости │
│ компонента и │значение допускаемого│ (относительное значение │
│ диапазон измерений, │ расхождения между │ допускаемого расхождения │
│ мкг/куб. см │ двумя результатами │ между двумя результатами │
│ │ параллельных │ измерений, полученными в │
│ │ определений), │ одной лаборатории, но в │
│ │ r , % │ разных условиях), │
│ │ n │ R_ , % │
│ │ │ Хl │
├─────────────────────┼─────────────────────┼─────────────────────────────┤
│Фенол, │ 10,3 │ 8,0 │
│от 0,04 до 0,40 вкл. │ │ │
└─────────────────────┴─────────────────────┴─────────────────────────────┘
10.1. Контроль
стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной
характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений.
Определяют содержания исследуемых соединений в градуировочных
растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного
интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданным и
измеренным значением концентраций не превышает 5%.
10.2. Контроль
повторяемости
Относительное расхождение между результатами двух измерений,
выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении
образцов одной и той же рабочей пробы с использованием одних и тех же
средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала
времени, не должно превышать значения предела повторяемости r , (табл. 3).
n
Повторяемость результатов параллельных измерений признают
удовлетворительной, если:
r Х + Х
n max min
Х - Х <= --- х -----------,
max min 100 2
где:
r - значение предела повторяемости, %;
n
Х - максимальный результат из 2-х параллельных измерений;
max
Х - минимальный результат из 2-х параллельных измерений.
min
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.3. Контроль воспроизводимости
Внутренний контроль воспроизводимости
проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и
анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения
анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа,
разные наборы мерной посуды и т.д.). Воспроизводимость
результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется
условие:
_ _
R_ Х + Х
_ _ Хl 1 2
|Х - Х | <= --- х -------,
1 2 100 2
где:
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
1
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных
2
измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см;
R_ - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, %
Хl
(табл. 3).
_ _
Расхождение между результатами измерений Х , и Х , полученными в разных
1 2
условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости R_ ,
Хl
при доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.
Если условие не выполняется, эксперимент
повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины,
приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.
10.4. Контроль
точности
Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении
результата контрольной процедуры, равного разности между результатом
_1
контрольного измерения содержания фенола в пробе с известной добавкой (Х )
_
в рабочей пробе без добавки (Х) и величиной добавки С (добавка должна
д
составлять не менее 40% от содержания фенола в рабочей пробе) с нормативом
точности К.
Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется
условие:
_1 _
|Х - Х - С | = К ,
д k
где:
_1
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных
измерений, мкг/куб. см;
_
Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого
компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;
С - величина добавки к пробе, мкг/куб. см.
д
_____________________________
/дельта _ 2 дельта _1 2
К = 0,84 х /(------ х Х) + (------ х Х ) .
\/ 100 100
Качество контрольной процедуры признают удовлетворительной при
выполнении условия: К <= К.
k
При превышении оперативного контроля
погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного
норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам
контроля, устраняют их и процедуру контроля повторяют.
Периодичность контроля исполнения процедуры
ВКК регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.
Литература
1. Бандман
А.Л., Войтенко Г.А., Волкова Н.В. и др. Вредные химические вещества.
Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов: Справ. изд./Под ред. В.А.Филова
и др. Л.: "Химия", 1990.
Методические указания разработаны
Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Т.В.Нурисламова, Н.А.Попова).