Измерение каждого градуировочного раствора повторяют 5 раз и рассчитывают среднее арифметическое значение величины аналитического сигнала. Устанавливают градуировочную зависимость массы элемента (в пикограммах) и соответствующие им величины средних значений аналитического сигнала. Полученная градуировочная зависимость регистрируется программой компьютера в режиме "Градуировка"/"Просмотр".

Рекомендуемые режимы температурно-временной программы работы печи при градуировке и анализе проб крови представлены в табл. 2. Режимы измерений градуировочных растворов и анализируемых проб должны совпадать.

Таблица 2

РЕКОМЕНДУЕМЫЕ РЕЖИМЫ ТЕМПЕРАТУРНО-ВРЕМЕННОЙ ПРОГРАММЫ

РАБОТЫ ПЕЧИ ПРИ ОБРАБОТКЕ ПРОБ

10. Подготовка проб к анализу

Пробу крови объемом 50 куб. мм разводят в 3 раза 1%-м раствором аскорбиновой кислоты. Разведение пробы учитывают в расчетной формуле результата анализа в виде коэффициента К (п. 12). В качестве холостого опыта используют 1%-й раствор аскорбиновой кислоты.

11. Выполнение измерений

Полученные после подготовки к анализу растворы проб крови и растворы холостых проб измеряют на атомно-абсорбционном спектрометре, подготовленном для определения ванадия. Для серии однотипных анализов в количестве 20 измерений готовят не менее 3 холостых проб.

Порядок проведения измерений осуществляют в соответствии с руководством по эксплуатации спектрометра. Объем дозированной пробы вводят с клавиатуры компьютера по запросу программы: в графитовую печь вводят дозатором 10 куб. мм подготовленной анализируемой пробы (т.е. разведенной в 3 раза), добавляют 10 куб. мм модификатора (1,5% нитрата палладия), затем осуществляют запуск температурно-временной программы работы печи.

После завершения всех этапов программы анализа на дисплее компьютера получают величину интегрального аналитического сигнала, массу и концентрацию определяемого компонента относительно градуировочного графика.

Точность настройки прибора проверяют введением аттестованных смесей заданной концентрации. В случае невыполнения условий стабильности градуировочной характеристики (п. 13.1) осуществляют рекалибровку.

12. Вычисление результатов измерений

Расчет содержания ванадия в крови проводят по формуле:

Х = К х (С - С'),

где:

С - концентрация ванадия, определяемая по градуировочному графику, мкг/куб. дм;

С' - значение концентрации ванадия в холостой пробе, мкг/куб. дм;

К - коэффициент разведения пробы крови в аскорбиновой кислоте;

Х - содержание исследуемого металла в крови, мкг/куб. дм .

    За  результат  измерения принимают среднее арифметическое значение двух

параллельных  определений  Х   , Х   , расхождение между которыми не должно

                            max   min

превышать предела повторяемости r  (табл. 4).

                                 n

    Результат  количественного  анализа в документах, предусматривающих его

использование, представляется в виде:

                        _

                       (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/ куб. дм,

    где:

    _

    Х - средний результат анализа, мкг/куб. дм,

                                 Х    + Х

                             _    max    min

                             Х = -----------;

                                      2

    ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. дм, при Р = 0,95,

                                      дельта _

                             ДЕЛЬТА = ------ Х;

                                       100

    дельта - значения погрешности приведены в табл. 3, %.

13. Внутренний контроль качества результатов измерений

Внутренний контроль (ВКК) качества результатов количественного химического анализа (повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений ванадия в крови с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 3, 4.

Таблица 3

ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ,

ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ

┌───────────────┬────────────────────┬────────────────────┬───────────────┐

│ Наименование  │     Показатель     │     Показатель     │  Показатель   │

│ определяемого │   повторяемости    │ воспроизводимости  │   точности    │

│ компонента и  │   (относительное   │   (относительное   │   (границы    │

│   диапазон    │среднеквадратическое│среднеквадратическое│ относительной │

│  измерений,   │     отклонение     │     отклонение     │погрешности при│

│  мкг/куб. дм  │  повторяемости),   │воспроизводимости), │  вероятности  │

│               │     сигма , %      │     сигма , %      │Р = 0,95), +/- │

│               │          r         │          R         │   сигма, %    │

├───────────────┼────────────────────┼────────────────────┼───────────────┤

│Ванадий, от 1,5│        4,82        │        3,11        │     7,65      │

│до 15,0 вкл.   │                    │                    │               │

└───────────────┴────────────────────┴────────────────────┴───────────────┘

Таблица 4

ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ

ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р = 0,95

┌──────────────────┬─────────────────────┬────────────────────────────────┐

│   Наименование   │Предел повторяемости │   Предел внутрилабораторной    │

│  определяемого   │(относительное       │воспроизводимости (относительное│

│   компонента и   │значение допускаемого│     значение допускаемого      │

│     диапазон     │расхождения между    │    расхождения между двумя     │

│    измерений,    │двумя результатами   │    результатами измерений,     │

│   мкг/куб. см    │параллельных         │полученными в одной лаборатории,│

│                  │определений), r , %  │ но в разных условиях), R  , %  │

│                  │               n     │                         _      │

│                  │                     │                         Хl     │

├──────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────────┤

│Ванадий, 1,5-15,0 │        13,35        │             8,627              │

│вкл.              │                     │                                │

└──────────────────┴─────────────────────┴────────────────────────────────┘

13.1. Контроль стабильности градуировочного графика

Для проведения контроля стабильности градуировочной зависимости перед началом работы выполняют два параллельных измерения концентраций аттестованных смесей, приготовленных по п. 6.3. Контроль повторяют после анализа каждых 15-20 проб.

Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и измеренными значениями концентраций не превышает 5%.

При несоответствии полученных результатов указанному нормативу процесс градуировки необходимо повторить.

13.2. Контроль повторяемости результатов анализа

    Для   проведения   контроля  повторяемости  используют  рабочие  пробы.

Относительное  расхождение между результатами двух определений, выполненных

одним оператором при анализе одной и той же рабочей пробы, с использованием

одних   и   тех  же  средств  измерений  и  реактивов  в  течение  возможно

минимального  интервала  времени,  не  должно  превышать  значения  предела

повторяемости   r    (табл.   4).  Повторяемость  результатов  параллельных

                 n

определений признают удовлетворительной, если:

                                    r     Х      Х

                                     n     max +  min

                     Х    - Х    <= --- х -----------,

                      max    min    100        2

    где:

    Х    - максимальный результат 2-х параллельных определений;

     max

    Х    - минимальный результат из 2-х параллельных определений.

     min

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

13.3. Контроль воспроизводимости

Для проведения контроля воспроизводимости используют рабочие пробы. Пробу делят на две равные части и каждую из них анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условиями проведения анализа, используя разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Анализы выполняют в разное время или два разных аналитика.

Воспроизводимость контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

                                         _    _

                                     R   Х  + Х

                                      _   1    2

                          _   _       Хl

                         |Х - Х | <= --- -------,

                           1   2     100    2

    где:

    _

    Х  -  средний  результат  анализа  рабочей  пробы  из двух параллельных

     1

измерений, мкг/куб. дм;

    _

    Х   -  средний  результат  анализа  этой же пробы  из двух параллельных

     2

измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. дм;

    R   - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости.

     _

     Хl

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

13.4. Контроль качества точности результатов измерений

    Контроль  точности  измерений с использованием метода добавок состоит в

сравнении   результата   контрольной   процедуры,  равного  разности  между

результатом  контрольного  измерения  содержания  анализируемого  металла в

пробе  с  известной  добавкой  (Х'),  в  рабочей  пробе  без  добавки (Х) и

величиной  добавки С  (добавка должна составлять не менее 40% от содержания

                    д

анализируемого металла в пробе) с нормативом точности К.

    Расчет проводят по формуле:

                                 _    _

                           К  = |Х' - Х - С |,

                            к              д

    где:

    _

    Х'  -  результат   контрольного   измерения   содержания  определяемого

компонента   в   рабочей  пробе  с  известной   добавкой,  средний  из двух

параллельных измерений, мкг/куб. дм;

    _

    Х  -  результат   контрольного   измерения   содержания   определяемого

компонента  в  рабочей  пробе,  средний  из  двух  параллельных  измерений,

мкг/куб. дм;

    С  - величина добавки к пробе, мкг/куб. дм.

     д

    Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

                              _____________________________

                             /дельта   _ 2    дельта   _  2

               К = 0,84 х   /(------ х Х)  + (------ х Х') .

                          \/   100             100

    Значения дельты приведены в табл. 3.

    Качество   контрольной   процедуры   признают   удовлетворительным  при

выполнении условия: К  <= К.

                     к

При невыполнении условия эксперимент повторяют. При повторном невыполнении условия выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Периодичность контроля исполнения процедуры ВКК регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.

Литература

1. Вредные вещества в промышленности: Справочник для химиков, инженеров и врачей/Под ред. Н.В.Лазарева и И.Д.Гадаскиной. Л.: "Химия", 1977. Т. III. С. 478.

Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Г.Н.Суетина, Л.В.Плахова, Г.И.Леготкина, Е.В.Стенно).